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目的
构建野生型和C112S突变型乳腺癌标志基因C35的原核表达载体，使其在原核细胞中高效表达、纯化并予以鉴定。
方法聚合酶链反应(PCR)法扩增野生型和突变型C35基因，将其分别插入原核表达载体pGLO1中，构建重组融合蛋白表达载体野生型pGLO1-C35和突变型pGLO1-C35，转化大肠杆菌E.coli BL21，经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达C35融合蛋白，并对诱导条件进行优化，通过镍离子螯合亲和层析柱纯化野生型和突变型C35融合蛋白，经蛋白质印迹法验证纯化的重组蛋白特异性。
结果成功构建了野生型和突变型C35基因的原核表达质粒，并将两种C35融合蛋白成功表达，最佳诱导表达条件为37℃，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导6 h，经纯化后获得高纯度的特异性重组蛋白，浓度达约1.5 mg/mL。
结论在原核表达系统中成功表达、纯化了野生型和突变型C35融合蛋白，为进一步制备基于C35抗血清的乳腺癌早期筛查试剂盒奠定了基础。