【摘 要】
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DNA 疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系,为了提高目的基因的表达量,本研究对NDV F48E9 株的 HN 基因进行了修饰,对修饰前后HN基因表达水平进行了比较.利
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室,新疆农业大学动物医学学院
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DNA 疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系,为了提高目的基因的表达量,本研究对NDV F48E9 株的 HN 基因进行了修饰,对修饰前后HN基因表达水平进行了比较.利用分子生物学软件将 NDV F48E9 株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子,同时在HN基因的5端加上同样已替换密码子的禽流感病毒 HA蛋白信号肽序列以期望提高目的蛋白在细胞中的表达.修饰后HN基因命名为 SoptiHN,剔除信号肽的 HN 基因命名为optiHN. 将 SoptiHN、optiHN 和 F48E9株的HN基因分别克隆到真核表达载体 pVAX1 和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列 CpG-ODN 的载体 pVAX1-CpG 中,将他们分别命名为 pV-SoptiHN、pVC-SoptiHN、pV-optiHN、pVC-optiHN 和pV-HN、pVC-HN,用这些质粒转染 293T 细胞,48小时后间接免疫荧光和 Western blotting 检测细胞中瞬时表达的 HN蛋白.结果显示,与未经修饰的HN基因相比,修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明显提高,并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量.
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