利用CRISPR/Cas9系统构建可诱导型猪Sohlh1基因敲除细胞系

来源 :华南农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenyingtg
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【目的】将Tet-on系统与CRISPR/Cas9系统相结合建立诱导敲除猪Sohlhl基因的细胞系。【方法】分离培养猪胎儿成纤维细胞(PFF),进行慢病毒载体PCW-eSpCas9(1.1)侵染并通过1 gg/mL瞟吟霉素筛选及强力霉素(Dox)诱导;改造pLV-sgRNA载体,进行293FT细胞转染验证;构建含Sohlhl基因目标靶点的pLV-sgRNA-2AGFP特异性载体,进行慢病毒包装检测;利用包装病毒侵染稳转PCW-eSpCas9(1.1)的PFF细胞,3μg/mL灭稻瘟菌素进行筛选,随后添加D
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