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【摘 要】目的：探讨地中海贫血基因检测在地中海贫血筛查诊断中的应用价值。 方法：对地贫调查中的1354例小学生进行血液常规检测、血红蛋白电泳和地中海贫血基因检测，统计分析三种筛查诊断方法的关系。 结果：以MCV≤80fl为标准筛查地贫，α地贫的漏诊率为35.87%，β地贫漏诊率为6.74%；以MCH≤25pg为筛查标准，α地贫漏诊率为38.48%，β地贫漏诊率为15.28%；以MCV≤80fl、MCH≤25pg联合为筛查标准，α地贫漏诊率为29.26%，β地贫漏诊率为5.96%；以血红蛋白电泳HbA2>3.5%为筛查标准，β地贫漏诊率为0.26%，发出现快速区带筛查α地贫漏诊率为98.00%。结论：MCV、MCH和血红蛋白电泳可作为地贫筛查的一种简单、方便、快速的方法，但不能作为金标准，地中海贫血基因检测在优生优育指导中起着不可替代的重要作用。
【关键词】人性化护理；ICU；应用
[Abstracr] Objective： Discuss the Mediterranean anemia gene detection in the diagnosis of the Mediterranean anemia screening application value. Method： Of the Mediterranean anemia’s survey 1354 cases of primary school students to proceed blood routine detection、hemoglobin electrophoresis and Mediterranean anemia gene test， statistical analysis of three kinds of screening diagnosis method of the relationship. Result： According to the MCV 80 fl or less Mediterranean anemia for standard screening， αMediterranean anemia missed diagnosis rate was 35.87%， βMediterranean anemia missed diagnosis rate was 6.74%； In MCH 25 pg or less for screening criteria， αMediterranean anemia missed diagnosis rate was 38.48%， β Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 15.28%； With the MCV80 fl， MCH 25 pg or less joint criteria for screening， α Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 29.26%， β Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 5.96%； By hemoglobin electrophoresis HbA2 > 3.5% for screening criteria，β Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 0.26%， send a quick zone screening α Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 98.00%. Conclusion： The MCV， MCH and hemoglobin electrophoresis can be used as the Mediterranean anemia screening method of a kind of simple、convenient、fast， but not as a gold standard， the Mediterranean anemia gene testing detects in guidance of eugenic and superior nurture plays an irreplaceable important role.
[Key words] MCV； MCH； Hemoglobin Electrophoresis； Mediterranean anemia gene
地中海贫血，又称海洋性贫血，亦称珠蛋白生成障碍性贫血。它是一组常染色体遗传性疾病，其发病机理是珠蛋白基因缺陷而导致一种或几种珠蛋白合成障碍，造成血红蛋白中的α类和β类珠蛋白比例失衡，以致引起慢性溶血性贫血。临床症状轻重不一，轻型地中海贫血一航无明显症状。对地贫的筛查诊断方法有多种，常用的有血液分析、血红蛋白电泳、红细胞脆性检测等，随着分子生物学技术的发展，地贫的基因诊断已被应用于临床。现对1354例在读小学生进行血液分析、血红蛋白电泳和地贫基因检测，分析地贫基因检测的重要性，报道如下：
1 资料与方法
1.1 受检对象：随机选取德宏州乡镇小学在读学生1354人。
1.2 仪器与试剂
1.2.1 仪器：杭州博日荧光定量PCR仪、日本东亚SysmexXT-1800i全自动血液学分析仪、美国CVP凝胶成像仪、韩国COMBI分子杂交箱、北京六一厂31B琼脂糖水平电泳仪
1.2.2 试剂：亚能生物技术（深圳）有限公司提供α-地贫和β-地贫基因检测试剂盒
1.3 方法
1.3.1 选取研究对象的血液常规参数MCV和MCH值：空腹静脉血2ml，注入EDTA-K2抗凝管混匀，于2h内用SysmexXT-1800i全自动血细胞分析仪计数，按照仪器操作规程严格进行操作，本实验室正常参考值：MCV 82.6～99.1fl MCH 26.2～33.3Pg。 1.3.2 地中海贫血基因分析：α地中海贫血基因分析采用跨越断裂点聚合酶链反应（GAP-PCR）技术，β地中海贫血基因分析采用PCR和反向斑点杂交法（RDB），试剂均由亚能生物技术（深圳）有限公司提供。
2 结果
1354名受检者中，α地贫469例，β地贫386例，基因型见表1。
MCV小于等于80fl869例，其中检出α地贫320例，β地贫360例，MCV大于80fl485例，其中检出α地贫179例，β地贫26例，以MCV小于等于80fl为筛查标准，α地贫漏检率为35.87%，β地贫漏检率为6.74%。
MCH小于等于25pg718例，其中检出α地贫307例，β地贫327例，MCH大于25pg636例，其中检出α地贫192例，β地贫59例，以MCH小于等于25pg为筛查标准，α地贫漏检率为38.48%，β地贫漏检率为15.28%。
血红蛋白电泳HbA2小于等于3.5% 940例，检出β地贫1例，出现HbH10例，α地贫漏检率为98.00%，β地贫漏检率为0.26%。还有28例HbA2大于3.5%可能为假阳性或β地贫基因点突变不能检出所致。
3 结论
血液分析红细胞参数MCV小于等于80fl、MCH小于等于25pg、HbA2大于3.5%作为地贫的筛查标准，有一定的假阳性率和漏检率，不能作为金标准，最终需依靠地贫基因检测诊断，指导孕前检查及产前筛查。
4 讨论
地中海贫血是一组遗传性溶血性疾病。其发病机制是合成血红蛋白的珠蛋白链减少或缺失导致血红蛋白结构异常，这种含有异常血红蛋白的红细胞变形性降低，寿命缩短，可以提前被人体的肝脾等破坏，导致贫血甚至发育等异常。据报道世界卫生组织的报告表明全世界大约有1.5亿人携带血红蛋白病的基因，主要分布于世界上的热带和亚热带地区，是世界上最常见的单基因遗传病[1]，我国的广西、广东、海南、贵州、云南、四川等省是地贫高发区[2]。德宏地区是地中海贫血特别高发地区，是本地区危害最严重的遗传性疾病。
地中海贫血有多种筛查方法，血液学指标MCV、MCH对地贫筛查敏感性较高，可自动化、大批量操作，适合用于大规模健康体检人群的地贫筛查，PCR技术是目前临床地贫基因确认的最佳手段[3]，基因诊断技术能确诊地贫缺失或突变[4]，有效地提高地贫的检出率，对优生优育、干预重症地贫儿出生有着重要作用[5]。
地中海贫血的临床分期及基因型：α-地中海贫血静止型基因携带者是由于缺失一个α-基因而引起的，最常见的是-α3.7缺失型（-α3.7/αα）其次是-α4.2缺失型（-α4.2/αα）。患者无任何症状，血象正常，红细胞内无包涵体。此型只有检测基因，才能被查出。α-地中海贫血标准型最常见的是-α3.7缺失型的纯合子（-α3.7/-α3.7）所引起，其次是由于缺失2个α-基因（--/αα）所致，多见于东南亚缺失型（SEA），患者亦无临床症状，血红蛋白正常或轻度下降，MCV、MCH、MCHC轻度下降，少数红细胞内有H包涵体。α-地中海贫血HbH病是由于缺失3个α-基因引起，多见于-α3.7/SEA或-α4.2/SEA，患者出生时贫血较轻或无贫血，此后贫血逐渐加重，通常为轻至中度贫血，当合并感染、妊娠、服用氧化性药物时贫血加重。血红蛋白Bart，s胎儿水肿综合征是由于缺失4个α-基因，完全没有α-珠蛋白合成所引起，是α-地中海贫血中最严重的一型。胎儿大多于妊娠28～38周死亡，或出生后几小时内夭折。静止型β-地中海贫血为大多数杂合子β-地中海贫血，患者没有任何症状，也没有贫血， HbA2略增高（>3.5%），但有的病例也可以正常。轻型β-地中海贫血为少数杂合子β-地中海贫血，患者有慢性轻度溶血性贫血，但生长发育正常，贫血可因感染、妊娠而加重。重型β-地中海贫血，此型为β-地中海贫血纯合子患者，须定期输血维持生命。
MCV和（或）RBC脆性试验虽在临床筛查地贫中具有重要临床价值，但部分地贫患者（特别是α地贫）MCV和（或）RBC脆性可以正常，是临床及产前筛查过程中造成地贫基因携带者漏诊的主要原因[6]。笔者调查的1354例小学生均为在读学生，经基因检测多表现为携带者（表1可见），MCV、MCH正常或轻度下降，α地贫漏检率高达35.87%。地贫为遗传性疾病，若夫妻同为轻型地中海贫血（基因携带者），每次怀孕，其子女有1/4的机会为正常，1/2的机会为轻型地贫患者（基因携带者），另1/4的机会为重型地中海贫血患者，如果只有一方是轻型地中海贫血或基因携带者，他们的子女有1/2的机会是正常小孩，1/4的机会是轻型地中海贫血（基因携带者），不会有重型地中海贫血小孩。所以，选择合适的检测方法，对携带者进行出生干预，是减少出生缺陷的有效措施[7、8]。因此，在遗传咨询及产前诊断方面，基因检测有着不可替代的重要作用。
参考文献
[1] 林敏.中国广东省东部地区的血红蛋白病的分子流行病学调查.南方医科大学（博士论文），2012.
[2] 赖永榕.地中海贫血的诊断治疗近况[J].内科急危重症杂志， 2012（06）： 12-16.
[3] 张银辉， 张允奇， 黄烈等. 地中海贫血诊断实验的选择在临床的应用价值[J].中华全科医学， 2011（03）： 126-128.
[4] 李莉， 林晓丹， 陈文璟. 400例地中海贫血基因检测分析[J].暨南大学学报， 2012（02）： 104-107.
[5] 黄，郭柳薇，李颖莉等.广东广西交界地区地中海贫血发生率及基因检测结果分析[J]. 中国优生与遗传杂志， 2008（09）： 14-16.[6] 朱学海，魏代奎.地中海贫血的基因诊断分析[J].中国实用医药. 2008（13）： 132-133.
[7] 高慧，李上奎.α-地贫静止型基因分析及临床意义[J].中国优生与遗传杂志， 2009（11）： 20-21.
[8] 杨艳.地中海贫血筛查及基因检测结果分析[J].中国临床新医学， 2012（12）： 65-67.
【关键词】人性化护理；ICU；应用
[Abstracr] Objective： Discuss the Mediterranean anemia gene detection in the diagnosis of the Mediterranean anemia screening application value. Method： Of the Mediterranean anemia’s survey 1354 cases of primary school students to proceed blood routine detection、hemoglobin electrophoresis and Mediterranean anemia gene test， statistical analysis of three kinds of screening diagnosis method of the relationship. Result： According to the MCV 80 fl or less Mediterranean anemia for standard screening， αMediterranean anemia missed diagnosis rate was 35.87%， βMediterranean anemia missed diagnosis rate was 6.74%； In MCH 25 pg or less for screening criteria， αMediterranean anemia missed diagnosis rate was 38.48%， β Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 15.28%； With the MCV80 fl， MCH 25 pg or less joint criteria for screening， α Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 29.26%， β Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 5.96%； By hemoglobin electrophoresis HbA2 > 3.5% for screening criteria，β Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 0.26%， send a quick zone screening α Mediterranean anemia missed diagnosis rate was 98.00%. Conclusion： The MCV， MCH and hemoglobin electrophoresis can be used as the Mediterranean anemia screening method of a kind of simple、convenient、fast， but not as a gold standard， the Mediterranean anemia gene testing detects in guidance of eugenic and superior nurture plays an irreplaceable important role.
[Key words] MCV； MCH； Hemoglobin Electrophoresis； Mediterranean anemia gene
地中海贫血，又称海洋性贫血，亦称珠蛋白生成障碍性贫血。它是一组常染色体遗传性疾病，其发病机理是珠蛋白基因缺陷而导致一种或几种珠蛋白合成障碍，造成血红蛋白中的α类和β类珠蛋白比例失衡，以致引起慢性溶血性贫血。临床症状轻重不一，轻型地中海贫血一航无明显症状。对地贫的筛查诊断方法有多种，常用的有血液分析、血红蛋白电泳、红细胞脆性检测等，随着分子生物学技术的发展，地贫的基因诊断已被应用于临床。现对1354例在读小学生进行血液分析、血红蛋白电泳和地贫基因检测，分析地贫基因检测的重要性，报道如下：
1 资料与方法
1.1 受检对象：随机选取德宏州乡镇小学在读学生1354人。
1.2 仪器与试剂
1.2.1 仪器：杭州博日荧光定量PCR仪、日本东亚SysmexXT-1800i全自动血液学分析仪、美国CVP凝胶成像仪、韩国COMBI分子杂交箱、北京六一厂31B琼脂糖水平电泳仪
1.2.2 试剂：亚能生物技术（深圳）有限公司提供α-地贫和β-地贫基因检测试剂盒
1.3 方法
1.3.1 选取研究对象的血液常规参数MCV和MCH值：空腹静脉血2ml，注入EDTA-K2抗凝管混匀，于2h内用SysmexXT-1800i全自动血细胞分析仪计数，按照仪器操作规程严格进行操作，本实验室正常参考值：MCV 82.6～99.1fl MCH 26.2～33.3Pg。 1.3.2 地中海贫血基因分析：α地中海贫血基因分析采用跨越断裂点聚合酶链反应（GAP-PCR）技术，β地中海贫血基因分析采用PCR和反向斑点杂交法（RDB），试剂均由亚能生物技术（深圳）有限公司提供。
2 结果
1354名受检者中，α地贫469例，β地贫386例，基因型见表1。
MCV小于等于80fl869例，其中检出α地贫320例，β地贫360例，MCV大于80fl485例，其中检出α地贫179例，β地贫26例，以MCV小于等于80fl为筛查标准，α地贫漏检率为35.87%，β地贫漏检率为6.74%。
MCH小于等于25pg718例，其中检出α地贫307例，β地贫327例，MCH大于25pg636例，其中检出α地贫192例，β地贫59例，以MCH小于等于25pg为筛查标准，α地贫漏检率为38.48%，β地贫漏检率为15.28%。
血红蛋白电泳HbA2小于等于3.5% 940例，检出β地贫1例，出现HbH10例，α地贫漏检率为98.00%，β地贫漏检率为0.26%。还有28例HbA2大于3.5%可能为假阳性或β地贫基因点突变不能检出所致。
3 结论
血液分析红细胞参数MCV小于等于80fl、MCH小于等于25pg、HbA2大于3.5%作为地贫的筛查标准，有一定的假阳性率和漏检率，不能作为金标准，最终需依靠地贫基因检测诊断，指导孕前检查及产前筛查。
4 讨论
地中海贫血是一组遗传性溶血性疾病。其发病机制是合成血红蛋白的珠蛋白链减少或缺失导致血红蛋白结构异常，这种含有异常血红蛋白的红细胞变形性降低，寿命缩短，可以提前被人体的肝脾等破坏，导致贫血甚至发育等异常。据报道世界卫生组织的报告表明全世界大约有1.5亿人携带血红蛋白病的基因，主要分布于世界上的热带和亚热带地区，是世界上最常见的单基因遗传病[1]，我国的广西、广东、海南、贵州、云南、四川等省是地贫高发区[2]。德宏地区是地中海贫血特别高发地区，是本地区危害最严重的遗传性疾病。
地中海贫血有多种筛查方法，血液学指标MCV、MCH对地贫筛查敏感性较高，可自动化、大批量操作，适合用于大规模健康体检人群的地贫筛查，PCR技术是目前临床地贫基因确认的最佳手段[3]，基因诊断技术能确诊地贫缺失或突变[4]，有效地提高地贫的检出率，对优生优育、干预重症地贫儿出生有着重要作用[5]。
地中海贫血的临床分期及基因型：α-地中海贫血静止型基因携带者是由于缺失一个α-基因而引起的，最常见的是-α3.7缺失型（-α3.7/αα）其次是-α4.2缺失型（-α4.2/αα）。患者无任何症状，血象正常，红细胞内无包涵体。此型只有检测基因，才能被查出。α-地中海贫血标准型最常见的是-α3.7缺失型的纯合子（-α3.7/-α3.7）所引起，其次是由于缺失2个α-基因（--/αα）所致，多见于东南亚缺失型（SEA），患者亦无临床症状，血红蛋白正常或轻度下降，MCV、MCH、MCHC轻度下降，少数红细胞内有H包涵体。α-地中海贫血HbH病是由于缺失3个α-基因引起，多见于-α3.7/SEA或-α4.2/SEA，患者出生时贫血较轻或无贫血，此后贫血逐渐加重，通常为轻至中度贫血，当合并感染、妊娠、服用氧化性药物时贫血加重。血红蛋白Bart，s胎儿水肿综合征是由于缺失4个α-基因，完全没有α-珠蛋白合成所引起，是α-地中海贫血中最严重的一型。胎儿大多于妊娠28～38周死亡，或出生后几小时内夭折。静止型β-地中海贫血为大多数杂合子β-地中海贫血，患者没有任何症状，也没有贫血， HbA2略增高（>3.5%），但有的病例也可以正常。轻型β-地中海贫血为少数杂合子β-地中海贫血，患者有慢性轻度溶血性贫血，但生长发育正常，贫血可因感染、妊娠而加重。重型β-地中海贫血，此型为β-地中海贫血纯合子患者，须定期输血维持生命。
MCV和（或）RBC脆性试验虽在临床筛查地贫中具有重要临床价值，但部分地贫患者（特别是α地贫）MCV和（或）RBC脆性可以正常，是临床及产前筛查过程中造成地贫基因携带者漏诊的主要原因[6]。笔者调查的1354例小学生均为在读学生，经基因检测多表现为携带者（表1可见），MCV、MCH正常或轻度下降，α地贫漏检率高达35.87%。地贫为遗传性疾病，若夫妻同为轻型地中海贫血（基因携带者），每次怀孕，其子女有1/4的机会为正常，1/2的机会为轻型地贫患者（基因携带者），另1/4的机会为重型地中海贫血患者，如果只有一方是轻型地中海贫血或基因携带者，他们的子女有1/2的机会是正常小孩，1/4的机会是轻型地中海贫血（基因携带者），不会有重型地中海贫血小孩。所以，选择合适的检测方法，对携带者进行出生干预，是减少出生缺陷的有效措施[7、8]。因此，在遗传咨询及产前诊断方面，基因检测有着不可替代的重要作用。
参考文献
[1] 林敏.中国广东省东部地区的血红蛋白病的分子流行病学调查.南方医科大学（博士论文），2012.
[2] 赖永榕.地中海贫血的诊断治疗近况[J].内科急危重症杂志， 2012（06）： 12-16.
[3] 张银辉， 张允奇， 黄烈等. 地中海贫血诊断实验的选择在临床的应用价值[J].中华全科医学， 2011（03）： 126-128.
[4] 李莉， 林晓丹， 陈文璟. 400例地中海贫血基因检测分析[J].暨南大学学报， 2012（02）： 104-107.
[5] 黄，郭柳薇，李颖莉等.广东广西交界地区地中海贫血发生率及基因检测结果分析[J]. 中国优生与遗传杂志， 2008（09）： 14-16.[6] 朱学海，魏代奎.地中海贫血的基因诊断分析[J].中国实用医药. 2008（13）： 132-133.
[7] 高慧，李上奎.α-地贫静止型基因分析及临床意义[J].中国优生与遗传杂志， 2009（11）： 20-21.
[8] 杨艳.地中海贫血筛查及基因检测结果分析[J].中国临床新医学， 2012（12）： 65-67.