【摘 要】
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对种子携带的番茄细菌性溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp,michiganensis)进行简单抽提和纯化,不经过DNA提取而以病原菌为模板直接进行一步法PCR检测,对纯菌液Direc
【机 构】
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甘肃出入境检验检疫局国家级外繁种子检疫重点实验室,甘肃出入境检验检疫局国家级外繁种子检疫重点实验室,甘肃出入境检验检疫局国家级外繁种子检疫重点实验室,甘肃出入境检验检疫局国家级外繁种子检疫重点实验室,
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对种子携带的番茄细菌性溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp,michiganensis)进行简单抽提和纯化,不经过DNA提取而以病原菌为模板直接进行一步法PCR检测,对纯菌液Direct-PCR最低检出限为2600个细菌/ mL,而Nested-PCR最低检出限可达到13个细菌/mL;对种子提取液,Direct-PCR不能检出,而Nested-PCR最低检出限可达到3×10~5个细菌/mL。一步法Nested-PCR可在12h内对番茄种子携带的番茄溃疡病菌进行准确的定性鉴定。并且方法方便快速,成本低,灵敏度高,适用于种子携带番茄溃疡病菌的快速鉴定。
Clavibacter michiganensis subsp (michiganensis) was briefly extracted and purified from seeds, and the DNA was extracted without extraction. The pathogen was directly used as a template for one-step PCR. The detection limit of Direct-PCR Was 2600 bacteria / mL, while the Nested-PCR detection limit was 13 bacteria / mL. For the seed extract, Direct-PCR could not be detected, but the detection limit of Nested-PCR was up to 3 × 10 ~ 5 Bacteria / mL. One-step Nested-PCR can accurately identify tomato canker tomato fungi carried by tomato seeds in 12h. The method is convenient, rapid, low in cost and high in sensitivity, and is suitable for the rapid identification of seeds carrying tomato canker.
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