目的:构建I-A^d/IgG2b Fc杆状病毒表达载体,使其在Sf9昆虫细胞内表达。方法:利用RT-PCR从BALB/c小鼠淋巴细胞中扩增出I-A^dα、I-A^dβ和IgG2b Fc目的基因序列,运用重叠PCR将I-A^dα和I-A^dβ分别与Fos和Jun的亮氨酸拉链序列相连,形成I-A^dα-Fos和I-A^dβ-Jun;利用酶切位点XbaⅠ将I-A^dα-Fos与IgG2b Fc段相连,形成I-A^dα-Fos-IgG2b Fc重组序列;分别将I-A^dα-Fos-IgG2b Fc和I-A^dβ-Jun插入杆状病毒表达载体pFastBac^TMDual的P_PH和P_P10两个启动子的下游,构建出重组载体pFastBac^TMDual+[I-A^d/IgG2b Fc];采用PCR及限制性内切酶对所构建的载体进行鉴定并测序;将pFastBac^TMDual+[I-A^d/IgG2b Fc]转入DH10Bac感受态,使其在转座子的作用下形成重组杆粒病毒Bacmid+[I-A^d/IgG2b Fc],利用脂质体转染试剂将重组表达载体转染至Sf9昆虫细胞,P4后大量感染Sf9昆虫细胞,收集上清通过PEG20000浓缩可得到IAd/IgG2b Fc二聚体融合蛋白,通过双抗体夹心ELISA及Western blot对表达的蛋白进行检测。结果:PCR及酶切鉴定以及测序结果证实所构建的pFastBac^TMDual+[I-A^d/IgG2b Fc]重组载体具有正确的序列;双抗体夹心ELISA和Western blot结果表明重组杆粒能成功感染Sf9昆虫细胞,并且表达的融合蛋白具有正确构象。结论:成功构建pFastBac^TMDual+[I-A^d/IgG2b Fc]杆状病毒表达载体,并在Sf9昆虫细胞中表达,为研究I-A^d限制性的T细胞奠定了基础。