目的 通过shRNA干扰高效敲低猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的表达,进而验证其对于糖脂代谢相关基因表达的影响,为构建2型糖尿病模型猪奠定基础。方法 首先通过重叠PCR方法克隆了猪IRS1基因全部的mRNA序列(4814bp)以及通过3RACE方法克隆了猪IRS2基因的部分3非编码区(3-untranslated region,3UTR)。然后,通过Real-time PCR筛选获得了能显著敲低这两个基因的shRNA片段,并在同时敲低IRS1和IRS2的猪肝脏细胞中,检测糖脂代谢相关基因的表达。结果 猪肝脏细胞中IRS1和IRS2的表达被显著的敲低,分别下降了78％和64％。另外,糖异生作用酶磷酸烯醇丙酮酸激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)和果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose-1,6-Bisphosphatase,F-1,6-BP)基因表达显著上升,并导致催化肝脏中糖酵解反应的葡糖激酶(glucokinase,Gck)基因表达的显著下降。同时,胆固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins,SREBP-1)基因的表达也显著上升以及胆固醇调节基因Abcg8,CYP7a1表达明显上调。结论 猪肝脏细胞中IRS1和IRS2基因的敲低可激活糖异生作用,并抑制糖酵解反应,从而导致糖代谢的异常,同时也能引起脂类代谢的异常。