不同因素对农杆菌介导的杉木转化效率的影响

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以杉木试管苗靠近茎尖的茎段为受体材料,研究6个影响杉木遗传转化效果的因素,初步确定杉木茎段较为合适的转化体系为:预培养1—3d,OD600 nm为0.1-0.4的菌液浸染10-15min,共培养3—5d,共培养基附加乙酰丁香酮(AS)80μmol·L^-1,共培养后延迟3d筛选。在初次筛选培养基上共得到186个卡那霉素(Km)抗性芽,在二次筛选培养基上获得39个Km抗性芽。PCR检测有2个Km抗性芽呈稳定阳性,初步证明外源天麻抗真菌蛋白(GAFP)基因已整合到这2个Km抗性芽的基因组DNA中。
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