论文部分内容阅读
摘 要：本文采用高校液相测定了桑椹颗粒中绿原酸的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸 （10：10：80）为流动相，检测波长为325nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。绿原酸在0.01～3.2mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。绿原酸的平均回收率为99.6%，RSD为0.88%；此方法简便、准确、重现性好，可用于桑椹颗粒中绿原酸的含量测定。
关键词：桑椹颗粒；绿原酸；含量
桑椹颗粒滋阴益肾，补血润燥。桑椹颗粒用于阴亏血燥引起的腰膝酸软，眩晕失眠，目昏耳鸣，肠燥便秘，口干舌燥，须发早白。桑葚子别名桑实、文武实、黑椹、桑枣、桑果等，为桑科落叶乔木桑树的成熟果实。桑葚子具有滋阴养血、生津、润肠的功效。《本草衍义》记载：“桑根白皮条中言：桑之用稍备；然独遗乌椹，桑之精英尽在于此。”桑葚子含有鞣酸（tannic acid）、苹果酸（malicacid）、维生素（vitamin）B1、油酸（oleic acid）、辛酸（caprylic acid）、肉豆蔻酸（myris-tic acid）、牻儿醇（geraniol）、芳樟醇（linalool）、a-蒎烯（α-pinene）等。本文采用高校液相测定了桑椹颗粒中绿原酸的含量。
1 仪器与试药
电子天平FA1004型（南京华欣分析仪器制造有限公司）；LU230四元低压梯度液相色谱分析系统（大连依利特分析仪器有限公司）；司）；EasyGuard保护柱（岛津技迩上海商贸有限公司）；BT-V20A/B高精度恒温水槽（上海百典仪器设备有限公司）；PH510台式精密酸度计（安莱立思仪器科技（上海）有限公司）；美国泽拉布Super超越系列全触屏超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；Globus超声波萃取设备（赛普泰克有限公司（上海比朗仪器制造有限公司）；UV-5500（PC）扫描型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（河南萨默生物科技有限公司）、乙酸铵（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、甲醇（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、醋酸铵（南京化学试剂股份有限公司）、醋酸（河南萨默生物科技有限公司）、磷酸（南京化学试剂股份有限公司）、三乙胺（南京化学试剂股份有限公司）、磷酸二氢铵（南京化学试剂股份有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）为流动相；检测波长为325nm。理论板数按绿原酸峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取桑椹颗粒，研细，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取5分钟，放冷，过滤，滤液转移至50毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品约10mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取桑椹颗粒辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法測定，结果在绿原酸出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.01、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，绿原酸对照品在0.01～3.2mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取绿原酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.63%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批桑椹颗粒样品6份，分别依照2.2项下供试品制0.89%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.2项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，0.2，0.，4，0.6、0.8、1.0小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品绿原酸峰面积积分值的RSD为0.86%。结果表明绿原酸至少在1小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的绿原酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.6%，RSD为0.88%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定桑椹颗粒三批样品中绿原酸的含量，含量分别为0.18mg/g、0.23mg/g、0.21mg/g。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80），乙腈-0.2%（质量分数）磷酸（体积比25：75），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸调PH值为6.0），甲醇-0.1%磷酸溶液（30：70），甲醇-异丙醇-乙腈（37∶61∶2），0.2%三乙胺溶液（用磷酸调pH至5.3）-乙腈（65∶35），0.045mol.L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈（2∶1）（用三乙胺调pH值至6.5），0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.6）-乙腈（70：30），乙腈-甲醇-水（10：5：85）（用磷酸调PH值为6.0），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），0.1mol.L-1磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.5）-乙腈（75∶25）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于桑椹颗粒中绿原酸的含量测定。桑椹颗粒中绿原酸的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]库尔班江，苏文琴，张鹏威.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量[J].时珍国医国药，2008（06）.
[2]金则新，李钧敏，朱小燕.夏蜡梅总黄酮、总绿原酸含量及其环境因子相关性分析[J].浙江大学学报（理学版），2007（04）.
[3]彭密军，张敏，刘建兰，周春山.高效液相色谱法测定杜仲颗粒中京尼平苷酸和绿原酸的含量[J].中国医院药学杂志，2005（04）.
[4]于华忠，李国章，李贵，罗丽梅.不同品种忍冬及不同部位中绿原酸的含量测定[J].食品研究与开发，2004（06）.
[5]王天志，李永梅，王志霄.金银花中3种有机酸的反相高效液相色谱法定量分析[J].药物分析杂志，2000（05）.
关键词：桑椹颗粒；绿原酸；含量
桑椹颗粒滋阴益肾，补血润燥。桑椹颗粒用于阴亏血燥引起的腰膝酸软，眩晕失眠，目昏耳鸣，肠燥便秘，口干舌燥，须发早白。桑葚子别名桑实、文武实、黑椹、桑枣、桑果等，为桑科落叶乔木桑树的成熟果实。桑葚子具有滋阴养血、生津、润肠的功效。《本草衍义》记载：“桑根白皮条中言：桑之用稍备；然独遗乌椹，桑之精英尽在于此。”桑葚子含有鞣酸（tannic acid）、苹果酸（malicacid）、维生素（vitamin）B1、油酸（oleic acid）、辛酸（caprylic acid）、肉豆蔻酸（myris-tic acid）、牻儿醇（geraniol）、芳樟醇（linalool）、a-蒎烯（α-pinene）等。本文采用高校液相测定了桑椹颗粒中绿原酸的含量。
1 仪器与试药
电子天平FA1004型（南京华欣分析仪器制造有限公司）；LU230四元低压梯度液相色谱分析系统（大连依利特分析仪器有限公司）；司）；EasyGuard保护柱（岛津技迩上海商贸有限公司）；BT-V20A/B高精度恒温水槽（上海百典仪器设备有限公司）；PH510台式精密酸度计（安莱立思仪器科技（上海）有限公司）；美国泽拉布Super超越系列全触屏超纯水系统（上海和泰仪器有限公司）；Globus超声波萃取设备（赛普泰克有限公司（上海比朗仪器制造有限公司）；UV-5500（PC）扫描型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（河南萨默生物科技有限公司）、乙酸铵（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、甲醇（天津市彪仕奇科技发展有限公司）、醋酸铵（南京化学试剂股份有限公司）、醋酸（河南萨默生物科技有限公司）、磷酸（南京化学试剂股份有限公司）、三乙胺（南京化学试剂股份有限公司）、磷酸二氢铵（南京化学试剂股份有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）为流动相；检测波长为325nm。理论板数按绿原酸峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取桑椹颗粒，研细，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取5分钟，放冷，过滤，滤液转移至50毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品约10mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取桑椹颗粒辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法測定，结果在绿原酸出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.01、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，绿原酸对照品在0.01～3.2mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取绿原酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.63%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批桑椹颗粒样品6份，分别依照2.2项下供试品制0.89%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.2项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，0.2，0.，4，0.6、0.8、1.0小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品绿原酸峰面积积分值的RSD为0.86%。结果表明绿原酸至少在1小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的绿原酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.6%，RSD为0.88%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定桑椹颗粒三批样品中绿原酸的含量，含量分别为0.18mg/g、0.23mg/g、0.21mg/g。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80），乙腈-0.2%（质量分数）磷酸（体积比25：75），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸调PH值为6.0），甲醇-0.1%磷酸溶液（30：70），甲醇-异丙醇-乙腈（37∶61∶2），0.2%三乙胺溶液（用磷酸调pH至5.3）-乙腈（65∶35），0.045mol.L-1磷酸二氢铵溶液-乙腈（2∶1）（用三乙胺调pH值至6.5），0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.6）-乙腈（70：30），乙腈-甲醇-水（10：5：85）（用磷酸调PH值为6.0），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），0.1mol.L-1磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH6.5）-乙腈（75∶25）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-0.1mol/L冰醋酸（10：10：80）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于桑椹颗粒中绿原酸的含量测定。桑椹颗粒中绿原酸的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]库尔班江，苏文琴，张鹏威.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量[J].时珍国医国药，2008（06）.
[2]金则新，李钧敏，朱小燕.夏蜡梅总黄酮、总绿原酸含量及其环境因子相关性分析[J].浙江大学学报（理学版），2007（04）.
[3]彭密军，张敏，刘建兰，周春山.高效液相色谱法测定杜仲颗粒中京尼平苷酸和绿原酸的含量[J].中国医院药学杂志，2005（04）.
[4]于华忠，李国章，李贵，罗丽梅.不同品种忍冬及不同部位中绿原酸的含量测定[J].食品研究与开发，2004（06）.
[5]王天志，李永梅，王志霄.金银花中3种有机酸的反相高效液相色谱法定量分析[J].药物分析杂志，2000（05）.