【摘 要】
：
目的 构建人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)基因cDNA全长的原核表达质粒(pET-28a(+)-hPTP1B)并在大肠杆菌中高效表达.方法 取2型糖尿病人(BMI＞28 kg·m-2)的淋巴细胞提取总RNA,RT-
【机 构】
：
安徽医科大学药学院,安徽医科大学基础医学院生化教研室,安徽医科大学第一附属医院内分泌科
论文部分内容阅读
目的 构建人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)基因cDNA全长的原核表达质粒(pET-28a(+)-hPTP1B)并在大肠杆菌中高效表达.方法 取2型糖尿病人(BMI＞28 kg·m-2)的淋巴细胞提取总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收构建克隆载体pMD-hPTP1B,测序后设计带酶切位点BamHⅠ和EcoRⅠ的引物,PCR后酶切连入pET-28a(+)中,转化DE3,IPTG诱导表达,SDS-PAGE后用Western blot检测其特异表达,并进一步对rhPTP1B诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化.结果 测序证实所得的hPTP1BcDNA序列与其在GenBank中的序列一致,重组质粒pET-28a(+)-hPTP1B的双酶切结果与预期大小完全一致,IPTG诱导后高效表达的蛋白质是其不溶性的包涵体形式.IPTG诱导的最佳浓度是0.05 mmol·L-1,时间为5 h,温度为37℃.结论 成功克隆了人PTP1B基因,构建了相应的原核表达载体并对原核体系诱导表达的条件进行了优化,使其能在DE3中高效表达,为筛选高特异的小分子抑制剂和制备相应的单克隆抗体打下坚实的基础.
其他文献
保险代位追偿权是保险法中古老而独具特色的一项制度,虽然存在时间已久,各国也在法律中对其进行规定,但在实践中人们对保险代位追偿权的认识不统一,也给审判实践带来一定的困
中国企业近年来劳资冲突频发。2009年“通钢”事件、2010年东南沿海的停工潮和2011年在广东省的“西铁城”等罢工事件中,罢工事实上成为中国工人在许多时候要求与资方进行谈
侵犯个人信息型信用卡诈骗犯罪作为一种新型犯罪,其本身具有作案手段隐蔽,多为团伙作案等区别于其他类型信用卡诈骗犯罪的典型特点。该类犯罪不但威胁个人信息安全,危害国家
在梳理经济学和社会学关于企业的理论的基础上,文童认为,企业是市场杜会的生产组织,是自由要素所有者之间的合约.企业合约具有效率属性和权力属性:对于劳动关系研究而言,两种
在社会领域发挥特色作用是共青团的职责和优势所在.凝聚引领各级团组织和广大团员青年积极参与社会建设,本文作者利用在大丰团市委挂职为契机,从市(县级市)、乡镇、行业协会
随着我国幼儿教育改革的不断深入,幼教工作者对幼儿教育的研究也朝着更深、更新、更具特色的方向发展,电化教教育手段的普遍运用便是其中的一个重要方面,电化教育手段即指教
随着社会的不断的发展,纪检监察干部怎样去坚持解放思想和与时俱进的路线,怎样去树立起为大局服务的牢固意识.尝试着把纪检监察和反腐倡廉的工作放到改革的中,不断的增强为大
在建设项目实际实施过程中,工程变更是一件经常发生的事情,本文叙述了目前工程变更现场管理混乱的原因,提出了造价师在发生工程变更时如何进行高效管理的措施及方法,希望能够
应用初等梁弯曲理论公式与平面杆系有限元法以及有限条法程序相结合的方法,建立了分析变高度箱梁桥剪力滞效应的计算模型。从两个算例(连续梁桥和悬臂梁桥)的计算结果发现,应
本文通过对动力学系统模型和对带有约束条件的优化控制问题的分析,以系统的动力学优化控制问题为对象,进一步将带有对称编码的遗传算法应用于带有约束条件的优化问题的求解中