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摘要：为提高食品中抗氧化剂BHA，BHT，TBHQ的检测效率，利用固相萃取-超高效液相色谱进行检测试验。结果表明：3种抗氧化剂在1.6～160 mg/L范围内线性关系良好，相关系数均大于0.99，方法检出限分别为10，10，4 mg/kg；添加水平为10倍检出限，回收率为96.0 %～101.4 %，相对标准偏差为0.9 %～3.9 %。
关键词：超高效液相色谱；检测方法；检出限；抗氧化剂
中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2019）02-0049-03
叔丁基对羟基茴香醚（BHA）和2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）是食品加工行业较常使用的抗氧化剂，将其添加于油脂和含脂肪高食品中，可稳定食品中的营养成分和脂溶性维生素。特丁基对苯二酚（TBHQ）是一种新型脂溶性抗氧化剂，低毒，用量少，抗氧化能力大于BHA和BHT，在延迟食品中油脂氧化变质方面应用广泛。采用固相萃取净化结合超高效液相色谱法同时测定食品中的BHA，BHT和TBHQ，简化样品前处理方法，提高结果准确性和灵敏度，旨为为日常检测及检验方法验证提供适用方法。
1 材料与方法
1.1 試剂
叔丁基对羟基茴香醚（BHA）、2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）、特丁基对苯二酚（TBHQ）混合标准溶液
（1 000 mg/L），由美国O2Si生产；甲醇（色谱纯）由美国fisher公司生产；乙腈（色谱纯）由美国fisher公司生产；正己烷（分析纯）由国药试剂有限公司生产；甲酸（分析纯）由天津试剂厂生产；色谱用水为符合《GB/T 6682-2008》规定的一级水。
1.2 仪器与设备
Waters H-Class超高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器）：美国 waters公司；色谱柱Waters BEH RP18 （2.1 mm ×50 mm，1.7 μm）；电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；超纯水制备系统：美国Milli-Q公司。
1.3 试验方法
1.3.1 标准溶液配制 移取适量体积的混合标准溶液，稀释成浓度为20，50，100，200，400 mg/L的标准工作液。
1.3.2 样品前处理 准确称取1.0 g（精确至0.01 g）试样于离心管中，加入5 mL乙腈饱和的正己烷溶液，涡旋1 min充分混匀，浸泡10 min。加入5 mL饱和氯化钠溶液，用5 mL正己烷饱和的乙腈溶液涡旋2 min，3 000 r/min离心5 min，收集乙腈层于试管中。重复提取2次，收集3次提取液，加入0.1 %甲酸溶液调节pH为4，待净化。
1.3.3 净化 在C18固相萃取柱中装入2 g无水硫酸钠，用5 mL甲醇活化萃取柱，再以5 mL乙腈平衡，弃去流出液。将所有提取液倾入柱中，弃去流出液，再以5 mL乙腈和甲醇的混合溶液洗脱。收集所有洗脱液，旋蒸至干，加2 mL乙腈定容，过0.22 μm有机滤膜，待测。
1.3.4 色谱条件 流动相的选择：选择0.5 %甲酸水溶液及甲醇溶液为流动相，配合梯度洗脱。流速：0.3 mL/min；柱温：35 ℃；进样量：0.4 μL。
对3种抗氧化剂在190～400 nm之间进行全波长扫描，确定检测波长为280 nm。为实现3种抗氧化剂完全分离，采用梯度洗脱方式，具体条件见表1。
在以上色谱条件下进样0.4 μL，以色谱峰面积外标法定量，色谱如图1所示。
1.3.5 方法回收率及精密度 为考察方法的可靠性，对3种合成着色剂进行加标回收率测定。将加标量定为检出限（10，4 mg/kg）及10倍检出限（100，40 mg/kg），按照1.3.2提取方法提取6份，计算回收率及精密度。
2 结果与分析
2.1 线性范围及检出限
噪声高3倍（S/N=3）相对应的浓度为检出限。线性方程、相关系数、线性范围及检出限见表2。
从表2可以看出，3种抗氧化剂在线性范围内的线性关系良好。
2.2 方法回收率及精密度
通过加标回收率试验，对方法进行回收率和精密度测定，结果见表3。
由表3可知：抗氧化剂的平均回收率为96.0%～101.4%，相对标准偏差为0.9%～3.9%（n=6），满足《GB/T27404-2008实验室质量控制规范 食品理化检测》对精密度和准确度的要求。
3 结论与讨论
建立固相萃取净化结合超高效液相色谱-二极管阵列检测器同时测定食品中3种抗氧化剂（BHA、BHT、TBHQ）的分析方法。样品用正己烷溶解后用乙腈提取，经C18固相萃取小柱净化后，以0.5 %甲酸水溶液-甲醇为流动相，采用Waters ACQUITY UPLC BEH RP18色谱柱实现待测物分离，以二极管阵列检测器检测，外标法定量。前处理简单，回收率高，精密度好，检测速度快，适用于食品中此3种抗氧化剂的检测。
建立的UPLC法具有以下特点：1） 分析速度快。分离3种抗氧剂仅需4.2 min，而国家标准《GB5009.32-2016食品安全国家标准 食品中9种抗氧化剂的测定》中第一法高效液相色谱法测定需30 min，其他方法需时大于15 min。2） 抗氧化剂分离效果好。由于采用小颗粒填充的短柱，因此具有较高的柱效和较低扩散体积。
参考文献
[1] 林捷，张彩云，郑申西，等.凝胶渗透色谱-高效液相色谱法测定食品中抗氧化剂BHA、BHT、TBHQ[J].中国卫生检验杂志，2010，20（7）：1 694-1 696.
[2] 冼燕萍，郭新东，罗海英，等.固相萃取-超高效液相色谱分离测定洗涤用品中4种荧光增白剂[J].色谱，2013，31（2）：162-169.
[3] 李兴根，乔勇升，韩芷玲，等.高效液相色谱测定食品中的7种抗氧化剂[J].分析测试学报，2012，31（10）：1 319-1 324.
[4] 郝媛媛，丁轶聪，张岩岩.HPLC-UV法测定食品中抗氧化剂特丁基对苯二酚（TBHQ）[J].中国卫生检验杂志，2010，20（4）：748-749.
[5] 左玉，张国娟，惠芳，郭玉晶.食品抗氧化剂的研究进展[J].粮食与油脂，2018，31（05）：1-3.
[6] 马滕霞.浅析高效液相色谱在食品添加剂检测中的应用[J].食品安全导刊，2018（36）：91.
关键词：超高效液相色谱；检测方法；检出限；抗氧化剂
中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1674-1161（2019）02-0049-03
叔丁基对羟基茴香醚（BHA）和2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）是食品加工行业较常使用的抗氧化剂，将其添加于油脂和含脂肪高食品中，可稳定食品中的营养成分和脂溶性维生素。特丁基对苯二酚（TBHQ）是一种新型脂溶性抗氧化剂，低毒，用量少，抗氧化能力大于BHA和BHT，在延迟食品中油脂氧化变质方面应用广泛。采用固相萃取净化结合超高效液相色谱法同时测定食品中的BHA，BHT和TBHQ，简化样品前处理方法，提高结果准确性和灵敏度，旨为为日常检测及检验方法验证提供适用方法。
1 材料与方法
1.1 試剂
叔丁基对羟基茴香醚（BHA）、2，6-二叔丁基对甲酚（BHT）、特丁基对苯二酚（TBHQ）混合标准溶液
（1 000 mg/L），由美国O2Si生产；甲醇（色谱纯）由美国fisher公司生产；乙腈（色谱纯）由美国fisher公司生产；正己烷（分析纯）由国药试剂有限公司生产；甲酸（分析纯）由天津试剂厂生产；色谱用水为符合《GB/T 6682-2008》规定的一级水。
1.2 仪器与设备
Waters H-Class超高效液相色谱仪（配二极管阵列检测器）：美国 waters公司；色谱柱Waters BEH RP18 （2.1 mm ×50 mm，1.7 μm）；电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；超纯水制备系统：美国Milli-Q公司。
1.3 试验方法
1.3.1 标准溶液配制 移取适量体积的混合标准溶液，稀释成浓度为20，50，100，200，400 mg/L的标准工作液。
1.3.2 样品前处理 准确称取1.0 g（精确至0.01 g）试样于离心管中，加入5 mL乙腈饱和的正己烷溶液，涡旋1 min充分混匀，浸泡10 min。加入5 mL饱和氯化钠溶液，用5 mL正己烷饱和的乙腈溶液涡旋2 min，3 000 r/min离心5 min，收集乙腈层于试管中。重复提取2次，收集3次提取液，加入0.1 %甲酸溶液调节pH为4，待净化。
1.3.3 净化 在C18固相萃取柱中装入2 g无水硫酸钠，用5 mL甲醇活化萃取柱，再以5 mL乙腈平衡，弃去流出液。将所有提取液倾入柱中，弃去流出液，再以5 mL乙腈和甲醇的混合溶液洗脱。收集所有洗脱液，旋蒸至干，加2 mL乙腈定容，过0.22 μm有机滤膜，待测。
1.3.4 色谱条件 流动相的选择：选择0.5 %甲酸水溶液及甲醇溶液为流动相，配合梯度洗脱。流速：0.3 mL/min；柱温：35 ℃；进样量：0.4 μL。
对3种抗氧化剂在190～400 nm之间进行全波长扫描，确定检测波长为280 nm。为实现3种抗氧化剂完全分离，采用梯度洗脱方式，具体条件见表1。
在以上色谱条件下进样0.4 μL，以色谱峰面积外标法定量，色谱如图1所示。
1.3.5 方法回收率及精密度 为考察方法的可靠性，对3种合成着色剂进行加标回收率测定。将加标量定为检出限（10，4 mg/kg）及10倍检出限（100，40 mg/kg），按照1.3.2提取方法提取6份，计算回收率及精密度。
2 结果与分析
2.1 线性范围及检出限
噪声高3倍（S/N=3）相对应的浓度为检出限。线性方程、相关系数、线性范围及检出限见表2。
从表2可以看出，3种抗氧化剂在线性范围内的线性关系良好。
2.2 方法回收率及精密度
通过加标回收率试验，对方法进行回收率和精密度测定，结果见表3。
由表3可知：抗氧化剂的平均回收率为96.0%～101.4%，相对标准偏差为0.9%～3.9%（n=6），满足《GB/T27404-2008实验室质量控制规范 食品理化检测》对精密度和准确度的要求。
3 结论与讨论
建立固相萃取净化结合超高效液相色谱-二极管阵列检测器同时测定食品中3种抗氧化剂（BHA、BHT、TBHQ）的分析方法。样品用正己烷溶解后用乙腈提取，经C18固相萃取小柱净化后，以0.5 %甲酸水溶液-甲醇为流动相，采用Waters ACQUITY UPLC BEH RP18色谱柱实现待测物分离，以二极管阵列检测器检测，外标法定量。前处理简单，回收率高，精密度好，检测速度快，适用于食品中此3种抗氧化剂的检测。
建立的UPLC法具有以下特点：1） 分析速度快。分离3种抗氧剂仅需4.2 min，而国家标准《GB5009.32-2016食品安全国家标准 食品中9种抗氧化剂的测定》中第一法高效液相色谱法测定需30 min，其他方法需时大于15 min。2） 抗氧化剂分离效果好。由于采用小颗粒填充的短柱，因此具有较高的柱效和较低扩散体积。
参考文献
[1] 林捷，张彩云，郑申西，等.凝胶渗透色谱-高效液相色谱法测定食品中抗氧化剂BHA、BHT、TBHQ[J].中国卫生检验杂志，2010，20（7）：1 694-1 696.
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[3] 李兴根，乔勇升，韩芷玲，等.高效液相色谱测定食品中的7种抗氧化剂[J].分析测试学报，2012，31（10）：1 319-1 324.
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[6] 马滕霞.浅析高效液相色谱在食品添加剂检测中的应用[J].食品安全导刊，2018（36）：91.