血小板裂解液替代胎牛血清培养间充质干细胞

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaokeai
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目的 观察人血小板裂解液(HPL)对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的形态、增殖、表面标志、诱导分化能力的影响.方法 取正常足月妊娠产妇脐带血,离心后收集血沉棕黄层及血清按4∶1混合后-20℃冻存,反复冻融2次后制成HPL,按10%比例加入培养基.分离获得UC-MSCs,在含10% HPL或10%胎牛血清(FBS)的培养基中培养,比较培养30 d所获得的累积倍增级、最大传代代数所获得的细胞数及第3代细胞6孔板中培养6d所获得的细胞量;通过流式细胞仪检测HPL对培养细胞的表面标志的影响;观察HPL对培养细胞的成骨、成脂及成软骨诱导分化能力的影响.结果 HPL或FBS培养的UC-MSCs形态相同,均为长梭形,传至第3代形态无明显改变.在HPL或FBS中培养30 d所获得的累积倍增级比较差异无统计学意义(P>0.05);HPL培养的细胞在第10代的细胞量[(7.5±0.4)×106个]明显多于10% FBS组[(4.3±0.2)×106个];第3代UC-MSCs在6孔板培养6d后,HPL组所得细胞数明显多于FBS组(P<0.05).流式结果显示,UC-MSCs表面高表达CD44、CD73、CD90、CD105,不表达或低表达CD11b、CD19、CD31、CD34、CD45及人类白细胞抗原DR基因(HLA-DR).与10% FBS培养的UC-MSCs比较,10% HPL培养并未影响其表面标记的表达.HPL或FBS培养的UC-MSCs均能进行三系诱导分化,其分化能力无明显差异.结论 HPL可以代替FBS来进行培养和扩增UC-MSCs.在保持其形态、表面标志、分化能力不变的情况下,UC-MSCs在HPL环境下增殖更快。

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