【摘 要】
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为研究脊椎动物真鲷脂蛋白脂肪酶(LPL)结构与功能关系以及探讨动脉粥样硬化形成机理,通过构建cDNA文库,克隆对动脉粥样硬化表现抗性的海水鱼真鲷LPL基因cDNA全序列.再通过PCR
【机 构】
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暨南大学生物工程学系,National ResearchInstitute of Aquaculture,中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带鱼类选育与养殖重点开放实验室
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为研究脊椎动物真鲷脂蛋白脂肪酶(LPL)结构与功能关系以及探讨动脉粥样硬化形成机理,通过构建cDNA文库,克隆对动脉粥样硬化表现抗性的海水鱼真鲷LPL基因cDNA全序列.再通过PCR方法扩增基因组DNA,获取内含子9及其两侧序列以确定外显子10的大小,最后通过RT-PCR,以β肌动蛋白为外参照,比较真鲷在食用两种脂肪含量不同饲料和摄食状态不同的处理条件下,肝脏和腹腔肠系膜脂肪组织LPL mRNA的相对水平.从腹腔肠系膜脂肪组织cDNA文库中克隆出LPL cDNA序列,其完整的开放阅读框架由1 536 bp组成,编码511个氨基酸残基.与哺乳类不同,真鲷LPL基因外显子10的开始部分是翻译的.LPL的催化位点、二硫键位点、N-糖基化位点、肝素结合区、脂质结合位点、介导脂蛋白与低密度脂蛋白受体结合位点、二聚体形成位点等主要功能域在真骨鱼类真鲷与其它脊椎动物间基本保守,但肝素结合区的碱性氨基酸残基含量较人类减少,并在结合脂质底物的疏水环套中出现插入片段.与哺乳类不同,真鲷LPL基因在成体肝脏存在诱导性表达,而在其腹腔肠系膜脂肪组织则存在与哺乳类相似的组成性表达.当真鲷喂食高脂饲料时,其饱食状态下肝脏LPL mRNA水平升高,但对其腹腔肠系膜脂肪组织LPL表达没有影响.当真鲷喂食标准商业饲料时,饥饿48 h可急剧提高其肝脏LPL表达水平,但降低其腹腔肠系膜脂肪组织LPL表达水平.真鲷LPL与人等哺乳类LPL在肝素结合区和脂质结合位点上的差异及其在肝脏的适应性表达,可能同优先使用脂类作为能源的鱼类对动脉粥样硬化的抗性有关.
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