【摘 要】
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建立了一种简单的焦磷酸测序用单链模板制备方法，以包含SNP6位点一段78bp序列为对象，采用非热启动Taq酶进行指数线性PCR扩增，通过加入甘油、BSA等PCR增强剂增加反应的效率和特异
【机 构】
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中国药科大学生命科学与技术学院,华东医学生物技术研究所,南京大学医学院
【基金项目】
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国家自然科学基金(No.30470454);日本日立中中央研究所资助项目
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建立了一种简单的焦磷酸测序用单链模板制备方法，以包含SNP6位点一段78bp序列为对象，采用非热启动Taq酶进行指数线性PCR扩增，通过加入甘油、BSA等PCR增强剂增加反应的效率和特异性。设计反应液A和B处理PCR产物中干扰焦测序的限制性引物、未完全反应的产物、焦磷酸和dNTPs等杂质，处理后1～2μL PCR产物就可直接用于焦测序检测。测定了BRCA1基因中5个乳腺癌相关的SNP位点，获得的图谱无非特异性信号，测得序列与参考序列一致，能够进行SNP分析，表明本方法可以制备高质量焦测序单链模板，且使焦测
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