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目的 利用网络药理学探索黄诺玛苷抗非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用靶点和信号通路,研究黄诺玛苷治疗NAFLD的作用机理.方法 ①在Swiss Target Prediction数据库中检索黄诺玛苷活性靶点,DisGeNET数据库中搜索疾病靶点,通过化合物靶点与疾病靶点作Venn分析得到黄诺玛苷调节NAFLD脂代谢的预测靶点.借助Biso Genet软件构建蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络图,利用Metascape数据库对核心靶点进行GO功能富集与KEGG通路富集分析,用Cytoscape软件绘制“靶点-通路”网络图.②采用db/db小鼠模型进行体内实验验证,30只雄性db/db小鼠按随机数字表法分为3组:db/m组(正常)、db/db模型组、db/db+黄诺玛苷组(50 mg/kg).给药12周后处死,取小鼠肝脏,检测肝脏TG、GSH、GSSG含量,HE和油红0染色观察肝脏病理学变化,qRT-PCR和Western blot检测小鼠肝脏脂代谢的关键mRNA及蛋白的表达水平.③HepG2细胞在游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs,油酸∶榈酸=2∶1)干预成模后,分为正常组、FFAs处理组(500 μmol/L)、FFAs+黄诺玛苷低中高浓度组(25、50、100 μmol/L),作用24 h.油红0染色检测HepG2细胞内TG的含量.qRT-PCR和Western blot检测HepG2细胞脂代谢的关键mRNA及蛋白的表达水平.结果 ①通过Venn分析,得到黄诺玛苷对接NAFLD的29个核心靶点,主要包括过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、血管内皮生长因子(VEGF)和丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)等.GO功能富集了6个分子功能、20个生物过程、5个细胞组分.KEGG富集的关键信号通路有40条,主要包括AMPK脂代谢通路、胰岛素抵抗(IR)通路、细胞凋亡通路等.②动物实验结果表明,黄诺玛苷能降低db/db模型组TG水平(P＜0.05),提高GSH/GSSG比例(P＜0.05).HE和油红0染色显示黄诺玛苷可逆转肝细胞的肿大,减少肝细胞内的脂滴浸润.qRT-PCR结果表明黄诺玛苷可以降低脂质合成基因ACC1、SCD1、FASN mRNA的表达(P＜0.05),增强β-氧化基因ACOX-1、CPT1αmRNA的表达(P＜0.05).Western blot结果显示,与db/db模型组相比,db/db+黄诺玛苷组SREBP、FASN蛋白水平显著降低(P＜0.05),PPARγ、PPARα蛋白水平显著升高(P＜0.05).③体外细胞实验表明,黄诺玛苷可以降低HepG2细胞的TG含量(P＜0.05),降低脂质合成基因SREBP、SCD1、ACC1的表达,提高CPT1α、ACOX-1 mRNA水平(P＜0.05).在蛋白水平,黄诺玛苷可以显著降低SREBP、FASN的表达(P＜0.05).结论 黄诺玛苷可能通过调节PPARy/SREBP/FASN信号通路改善氧化应激,增强脂肪酸β-氧化并减少脂质合成,对NAFLD发挥治疗作用.