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目的 构建细胞核增殖抗原(Ki-67)启动子调控表达Ki-67基因和人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因小干扰RNA(siRNA)的条件增殖腺病毒.方法 (1)合成hTERT-siRNA插入pSilencer3.1,构建pShTERTsiRNA质粒.(2)分别酶切Ki-67启动子质粒pZKi-67、Ki-67-siRNA质粒pZD55-Ki-67-siRNA,获得Ki-67启动子片段和Ki-67-siRNA片段并连接,构建质粒pZKi-67-ZD-Ki-67-siRNA.(3)以pShTERT-siRNA为模板,PCR获得hTERT-siRNA及H1启动子片段,克隆进pZKi-67-ZD-Ki-67-siRNA,构建质粒pZKi-67-ZD-Ki-67-siRNA-hTERT-siRNA.(4)将其与腺病毒骨架质粒pBHGE3共转染293细胞,9 ～12d后出现病毒空斑.提取重组腺病毒DNA,行聚合酶链反应(PCR)鉴定.结果 病毒ZKi-67-ZD-Ki-67-siRNA-hTERT-siRNA构建成功,其包含Ki-67启动子、Ki-67-siRNA、hTERT-siRNA 片段.结论 成功构建Ki-67启动子调控荷载Ki-67、hTERT双基因RNA干扰的条件增殖腺病毒,为研究靶向肿瘤治疗奠定基础。