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摘 要：采用紫外分光光度计法分别在412 nm和670 nm处测定不同颜色的蛋壳溶液的吸光值，同时测定血清中不同生化指标的含量。结果表明，原卟啉在4种颜色的蛋壳血清中的含量差异达到极显著水平（P<0.01）；原卟啉在不同颜色的蛋壳中的含量与其相应血清中含量为极显著负相关（P <0.01）。利用原卟啉在不同类型鸡血清中的含量及反光值的不同，对其后代幼雏进行选育，以便检查该方法在育种上的准确性。
关键词：原卟啉；育种；色素；血清
中图分类号：S831.2 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.05.004
改革开放30年来，国民经济迅速发展，国内总体消费水平不断提高，人们对鸡蛋品质及鸡肉品质的要求亦日益提高，与此同时，各主要育种公司为了满足市场的需求，纷纷加快对优良种鸡的选育，种鸡场对孵化率越来越重视。其中蛋品质是衡量蛋鸡生产性能的重要指标[1]，同样也是蛋鸡育种重要的选种指标。新科技的进展促进了动物育种的实践，现在的我们处在一个新的时代，即生物技术时代。虽然对生物技术怎样改变动物育种难以绝对化，但是，可以乐观的预言：人类将很快创造出“设计动物”，即用基因来建造。但是，生物技术的进展对动物育种的影响范围和程度将取决于它们的有效性、实用性以及成本。因此在分子生物技术难以在实际大规模的生产中应用时，我们可以用血液中生化指标对育种进行实践操作，即测定某一特定品种血清中某种特定指标的含量，对后代群体的育种选育从幼雏的血液测定开始，从而减少饲料、人力等资源[2]。中国农业大学宁中华教授已经着手开始利用此方法对紫壳蛋鸡的选育。我国一些地方鸡种中这种蛋的比例较高，在20世纪70年代以前出口到香港等地非常受欢迎。
1 材料和方法
1.1 试验材料
试验鸡群来自北农大种禽有限公司的褐壳鸡群、紫壳鸡群、白来航鸡群、粉壳蛋鸡群，每组选取30只抽血，用作标准曲线的制定，同时抽取台山科朗现代农业有限公司的黄麻鸡群血样300份。
1.2 仪器设备与试剂
美国VARIAN公司生产的CaryEclipse型荧光分光度计；法国生产的JouanA13毛细管高速离心机；肝素抗凝剂：取一支12 500 U肝素抗凝剂，用0.68%氯化钠溶液稀释至25 mL（500 U·mL-1）；5%硅藻土生理盐水悬浮液：称取5 g硅藻土，以生理盐水配制成100 mL；4∶1乙酸乙酯-冰乙酸混合液；0.5 mol·L-1盐酸。
1.3 试验步骤
（1）试验各管按表1配制。
（2）分别涡旋混合15 s，然后1 369.55×g离心10 min。
（3）取3 mL上清液，各加0.5 mol·L-1的盐酸4 mL，再混合5 min，吸去上层有机溶剂，取下层盐酸溶液，狭缝宽度为20 nm，在激发虑片408 nm和散射虑片604 nm下测定吸光强度。
（4）取抗凝血0.03 mL于毛细管内，再将盛血的毛细管放入高速离心机中离心，12 000 r·min-1，取出后测定每个血样的红细胞体积，然后用步骤（3）中得到的血样吸收值除以每个血样的红细胞压积，得到每单位红细胞中游离原卟啉的相对含量。
1.4 试验样品的前处理
采用Ito等[3]的方法，將鸡蛋蛋壳在80 ℃的条件下烘干12 h，将烘干的蛋壳进行称质量，然后研碎。每个个体取0.25 g蛋壳用4 mL溶解液（甲醇与浓盐酸按2∶1的比例混合而成）溶解，将溶解液避光静置12 h，以1 369.55×g离心45 min。最后用紫外分光光度计分别在412 nm和670 nm处测定蛋壳溶解液的吸光值。
1.5 标准曲线的制作
取原卟啉0.36 mg，胆绿素0.26 mg，分别溶于6 mL溶剂（甲醇∶浓盐酸=2∶1）中，漩涡震荡，避光溶解12 h，这样分别制备成原卟啉标准原液和胆绿素标准品原液。使用5 mL大枪头在若干空白的10 mL管中加入3 mL溶剂（甲醇∶浓盐酸=2∶1），然后进行梯度稀释，用同样的方法分别制备成最高稀释至512倍的原卟啉和胆绿素溶液。最后，用紫外分光光度计分别在412 nm和670 nm处测定蛋壳溶解液的吸光值。
1.6 数据分析与统计方法
利用SAS 6.12软件进行相关性分析、回归分析和差异性检测。数据采用平均数±标准差来表示。
2 结果与分析
从图1中可以看出，4种颜色的蛋壳反光值有一个总的趋势，即从白色蛋到褐壳蛋的反光值逐渐的降低，但是不同颜色的蛋壳反光值之间很难确定有一个明显的界限，因此，很难用反光值作为某种颜色蛋壳的判定标准，只能将其作为某种蛋壳颜色的特征。
在育种工作的实际操作过程中，由于鸡蛋颜色的确定是在母鸡达到一定日龄后产蛋才能实现，所以那些不需要的鸡群个体在此期间要耗费大量的人力、饲料等，从而大大增加了我们育种的成本，造成不必要的浪费，因此需要一种在分子生物技术不能大规模应用的条件下，可以提前确定所需要个体的方法。
从表2可以发现，血清中原卟啉的相对含量从白壳蛋鸡到褐壳蛋鸡呈逐渐降低的趋势，差异达到极显著水平（P<0.01），而且这一趋势与原卟啉在不同颜色的蛋壳中的含量趋势是相反的。
在分子生物技术以前，最早有人提出利用血型作为育种上早期选择的依据，各种动物的血型系统不同，表现型与基因型也不同，某系统的等位基因数为n，则其基因型数为n（n+1）/2[4-5]。在理论上，血型组合数为各血型系统基因数的乘积，但实际上数目很大。所以，除一卵双生外，所有血型系统的基因型都相同的个体是很难见到的[6]。在此启发下，我们可以用血液中生化指标对育种进行实践操作，即测定某一特定品种血清中某种特定的含量对后代群体从幼雏开始测定，从而减少饲料、人力等资源[7-8]。台山科朗现代农业有限公司正在利用蛋壳中原卟啉总含量与血清中原卟啉含量的对应关系，对尚未开产的纯系鸡群进行抽血检测，测定其中含量后，与标准曲线进行比对，针对将来市场需要，确定留种鸡只个体将来产蛋的颜色，利用早期选择来减少后期的饲养成本。
3 结论与讨论
血清中原卟啉的相对含量从白壳到褐壳蛋鸡是逐渐降低的，差异达到极显著水平（P<0.01），而且这一趋势与原卟啉在各种颜色的蛋壳中的含量趋势是相反的。总量不同的胆绿素与原卟啉再按不同的比例沉积到蛋壳中[9]，就会形成深浅不同的各种颜色的蛋壳[10]。因此，我们可以用血液中生化指标对育种进行实践操作，从而减少在育种中的经济浪费，提高育种工作效率 [11]。随着科朗现代农业有限公司在血清中某种物质含量的利用技术的不断成熟，在分子育种手段不能大规模应用于现代育种的现实约束下，科朗育种将首先探索出一条新的育种路径。
参考文献：
[1] 牛金明.褐色种蛋壳色深浅与其孵化率的关系[J].中国家禽，2000，22（3）：31.
[2] 王克华，曲亮. 如皋黄鸡产蛋性能与遗传参数分析[J].中国畜牧杂志，2006，46（9）：12-14.
[3] Dal Barto L. Salmonella situation in lation americal with special reference to brazil[R].Germany，2011.
[4] 王金玉，陈国宏. 数量遗传与动物育种[M].南京：东南大学出版社，2004：261-262.
[5] 王谦. 优质黄羽肉鸡开产日龄选择方法的研究[D].广州：华南农业大学，2004.
[6] 孙宏进. 对发展优质地方家禽产业的思考[J].中国禽业导刊，2002（16）：261-262.
[7] 李国清. 鸡球虫病血[M].北京：中国农业大学出版社，1988.
[8] 塞弗. 禽病学[M]. 苏敬良，译.第11版.北京：中国农业出版社，2005：178.
[9] 吴清民. 兽医传染学[M].北京：中国农业出版社，2002：252-255.
[10] 陈宽维，韩威. 我国黄羽肉鸡育种成绩及发展趋势[J]. 中国家禽，2010，32（Z2）：30-34.
[11] 王伯法. 病理学技术[M]. 北京：人民卫生出版社，2006.
关键词：原卟啉；育种；色素；血清
中图分类号：S831.2 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.05.004
改革开放30年来，国民经济迅速发展，国内总体消费水平不断提高，人们对鸡蛋品质及鸡肉品质的要求亦日益提高，与此同时，各主要育种公司为了满足市场的需求，纷纷加快对优良种鸡的选育，种鸡场对孵化率越来越重视。其中蛋品质是衡量蛋鸡生产性能的重要指标[1]，同样也是蛋鸡育种重要的选种指标。新科技的进展促进了动物育种的实践，现在的我们处在一个新的时代，即生物技术时代。虽然对生物技术怎样改变动物育种难以绝对化，但是，可以乐观的预言：人类将很快创造出“设计动物”，即用基因来建造。但是，生物技术的进展对动物育种的影响范围和程度将取决于它们的有效性、实用性以及成本。因此在分子生物技术难以在实际大规模的生产中应用时，我们可以用血液中生化指标对育种进行实践操作，即测定某一特定品种血清中某种特定指标的含量，对后代群体的育种选育从幼雏的血液测定开始，从而减少饲料、人力等资源[2]。中国农业大学宁中华教授已经着手开始利用此方法对紫壳蛋鸡的选育。我国一些地方鸡种中这种蛋的比例较高，在20世纪70年代以前出口到香港等地非常受欢迎。
1 材料和方法
1.1 试验材料
试验鸡群来自北农大种禽有限公司的褐壳鸡群、紫壳鸡群、白来航鸡群、粉壳蛋鸡群，每组选取30只抽血，用作标准曲线的制定，同时抽取台山科朗现代农业有限公司的黄麻鸡群血样300份。
1.2 仪器设备与试剂
美国VARIAN公司生产的CaryEclipse型荧光分光度计；法国生产的JouanA13毛细管高速离心机；肝素抗凝剂：取一支12 500 U肝素抗凝剂，用0.68%氯化钠溶液稀释至25 mL（500 U·mL-1）；5%硅藻土生理盐水悬浮液：称取5 g硅藻土，以生理盐水配制成100 mL；4∶1乙酸乙酯-冰乙酸混合液；0.5 mol·L-1盐酸。
1.3 试验步骤
（1）试验各管按表1配制。
（2）分别涡旋混合15 s，然后1 369.55×g离心10 min。
（3）取3 mL上清液，各加0.5 mol·L-1的盐酸4 mL，再混合5 min，吸去上层有机溶剂，取下层盐酸溶液，狭缝宽度为20 nm，在激发虑片408 nm和散射虑片604 nm下测定吸光强度。
（4）取抗凝血0.03 mL于毛细管内，再将盛血的毛细管放入高速离心机中离心，12 000 r·min-1，取出后测定每个血样的红细胞体积，然后用步骤（3）中得到的血样吸收值除以每个血样的红细胞压积，得到每单位红细胞中游离原卟啉的相对含量。
1.4 试验样品的前处理
采用Ito等[3]的方法，將鸡蛋蛋壳在80 ℃的条件下烘干12 h，将烘干的蛋壳进行称质量，然后研碎。每个个体取0.25 g蛋壳用4 mL溶解液（甲醇与浓盐酸按2∶1的比例混合而成）溶解，将溶解液避光静置12 h，以1 369.55×g离心45 min。最后用紫外分光光度计分别在412 nm和670 nm处测定蛋壳溶解液的吸光值。
1.5 标准曲线的制作
取原卟啉0.36 mg，胆绿素0.26 mg，分别溶于6 mL溶剂（甲醇∶浓盐酸=2∶1）中，漩涡震荡，避光溶解12 h，这样分别制备成原卟啉标准原液和胆绿素标准品原液。使用5 mL大枪头在若干空白的10 mL管中加入3 mL溶剂（甲醇∶浓盐酸=2∶1），然后进行梯度稀释，用同样的方法分别制备成最高稀释至512倍的原卟啉和胆绿素溶液。最后，用紫外分光光度计分别在412 nm和670 nm处测定蛋壳溶解液的吸光值。
1.6 数据分析与统计方法
利用SAS 6.12软件进行相关性分析、回归分析和差异性检测。数据采用平均数±标准差来表示。
2 结果与分析
从图1中可以看出，4种颜色的蛋壳反光值有一个总的趋势，即从白色蛋到褐壳蛋的反光值逐渐的降低，但是不同颜色的蛋壳反光值之间很难确定有一个明显的界限，因此，很难用反光值作为某种颜色蛋壳的判定标准，只能将其作为某种蛋壳颜色的特征。
在育种工作的实际操作过程中，由于鸡蛋颜色的确定是在母鸡达到一定日龄后产蛋才能实现，所以那些不需要的鸡群个体在此期间要耗费大量的人力、饲料等，从而大大增加了我们育种的成本，造成不必要的浪费，因此需要一种在分子生物技术不能大规模应用的条件下，可以提前确定所需要个体的方法。
从表2可以发现，血清中原卟啉的相对含量从白壳蛋鸡到褐壳蛋鸡呈逐渐降低的趋势，差异达到极显著水平（P<0.01），而且这一趋势与原卟啉在不同颜色的蛋壳中的含量趋势是相反的。
在分子生物技术以前，最早有人提出利用血型作为育种上早期选择的依据，各种动物的血型系统不同，表现型与基因型也不同，某系统的等位基因数为n，则其基因型数为n（n+1）/2[4-5]。在理论上，血型组合数为各血型系统基因数的乘积，但实际上数目很大。所以，除一卵双生外，所有血型系统的基因型都相同的个体是很难见到的[6]。在此启发下，我们可以用血液中生化指标对育种进行实践操作，即测定某一特定品种血清中某种特定的含量对后代群体从幼雏开始测定，从而减少饲料、人力等资源[7-8]。台山科朗现代农业有限公司正在利用蛋壳中原卟啉总含量与血清中原卟啉含量的对应关系，对尚未开产的纯系鸡群进行抽血检测，测定其中含量后，与标准曲线进行比对，针对将来市场需要，确定留种鸡只个体将来产蛋的颜色，利用早期选择来减少后期的饲养成本。
3 结论与讨论
血清中原卟啉的相对含量从白壳到褐壳蛋鸡是逐渐降低的，差异达到极显著水平（P<0.01），而且这一趋势与原卟啉在各种颜色的蛋壳中的含量趋势是相反的。总量不同的胆绿素与原卟啉再按不同的比例沉积到蛋壳中[9]，就会形成深浅不同的各种颜色的蛋壳[10]。因此，我们可以用血液中生化指标对育种进行实践操作，从而减少在育种中的经济浪费，提高育种工作效率 [11]。随着科朗现代农业有限公司在血清中某种物质含量的利用技术的不断成熟，在分子育种手段不能大规模应用于现代育种的现实约束下，科朗育种将首先探索出一条新的育种路径。
参考文献：
[1] 牛金明.褐色种蛋壳色深浅与其孵化率的关系[J].中国家禽，2000，22（3）：31.
[2] 王克华，曲亮. 如皋黄鸡产蛋性能与遗传参数分析[J].中国畜牧杂志，2006，46（9）：12-14.
[3] Dal Barto L. Salmonella situation in lation americal with special reference to brazil[R].Germany，2011.
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[5] 王谦. 优质黄羽肉鸡开产日龄选择方法的研究[D].广州：华南农业大学，2004.
[6] 孙宏进. 对发展优质地方家禽产业的思考[J].中国禽业导刊，2002（16）：261-262.
[7] 李国清. 鸡球虫病血[M].北京：中国农业大学出版社，1988.
[8] 塞弗. 禽病学[M]. 苏敬良，译.第11版.北京：中国农业出版社，2005：178.
[9] 吴清民. 兽医传染学[M].北京：中国农业出版社，2002：252-255.
[10] 陈宽维，韩威. 我国黄羽肉鸡育种成绩及发展趋势[J]. 中国家禽，2010，32（Z2）：30-34.
[11] 王伯法. 病理学技术[M]. 北京：人民卫生出版社，2006.