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【摘要】 目的：研究探索在诊断婴儿巨细胞病毒感染中采用尿液巨细胞病毒DNA联合血清巨细胞病毒特异抗体检测的诊断价值，评估其临床意义。方法：选择2014年2月-2015年5月本院收诊的90例疑似巨细胞病毒感染的婴幼儿为研究对象，采用尿液巨细胞病毒DNA和血清巨细胞病毒特异抗体对患儿进行检测，比较单一检测及联合检测与治疗前后患儿检测结果。结果：尿液巨细胞病毒DNA检测的阳性率58.89%（53/90）、特异性62.22%（56/90）与血清巨细胞病毒特异抗体检测阳性率51.11%（46/90）、特异性61.11%（55/90）比较差异均无统计学意义（P>0.05）；联合检测的阳性率78.89%（71/90）、特异性91.11%（82/90）与两种单一检测比较差异均有统计学意义（P<0.05）；治疗后，患儿尿液巨细胞病毒DNA和血清巨细胞病毒特异抗体含量均低于治疗前（P<0.05）。结论：在诊断婴儿巨细胞病毒感染中采用尿液巨细胞病毒DNA联合血清巨细胞病毒特异抗体检测的临床效果理想，值得推广应用。
【关键词】 巨细胞病毒； 尿液巨细胞病毒DNA； 血清巨细胞病毒特异抗体； 诊断价值
【Abstract】 Objective：To study the diagnostic value of exploring the use of CMV DNA in urine and serum of CMV-specific antibody detection in the diagnosis of cytomegalovirus infection in infants， to assess its clinical significance.Method：From February 2014 to May 2015 in our hospital received 90 cases of suspected diagnosis of cytomegalovirus infection in infants for the study，they were given the urine CMV DNA and CMV-specific serum antibody detection in children.The results of a single test and combined two detection methods were compared with treatment of children before and after.Result：The positive rate of CMV DNA detection in urine was 58.89% （53/90），specificity was 62.22% （56/90） and specificity of serum antibody positive rate of CMV was 51.11%（46/90），specificity was 61.11%（55/90） showed no significant difference（P>0.05）.The positive rate of CMV DNA in urine and serum of CMV-specific antibody detection was 78.89% （71/90），and specificity was 91.11%（82/90），compared with two single species detection methods detect，the differences were statistically significant（P<0.05）.After treatment，CMV DNA and serum of CMV-specific antibody were lowher than before treatment（P<0.05）.Conclusion：In the diagnosis of infantile cytomegalovirus infection cytomegalovirus DNA over urine and serum antibody detection of CMV-specific clinical results，should be widely applied.
【Key words】 Cytomegalovirus； Urine cytomegalovirus DNA； CMV-specific antibodies in serum； Diagnostic value
First-author’s address：Fanyu District Shawan People’s Hospital of Guangzhou，Guangzhou 511400，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.19.034
巨细胞病毒（CMV）感染是一种人类感染性疾病，在我国感染率在逐年上升。感染主要发生在婴幼儿期，但巨细胞病毒感染的患者无论有无症状都会在其体液中被检测出来[1]。婴幼儿感染时身体系统会发生多处病变，引起严重的并发症，危及患儿的生命。为探索在诊断婴儿巨细胞病毒感染中采用尿液巨细胞病毒DNA联合血清巨细胞病毒特异抗体检测的诊断价值，分析应用价值，本文选取2014年2月-2015年5月收诊的90例疑似巨细胞病毒感染的婴幼儿为研究对象，报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2014年2月-2015年5月本院收诊的90例疑似巨细胞病毒感染的婴幼儿。所有患儿均符合巨细胞病毒感染诊断方案的诊断标准，患儿中男61例，女29例；年龄1～14个月，平均（2.12 ±0.65）个月；本研究经本院伦理委员会批准进行，且家属均已在知情同意书上签字。 1.2 检测方法
1.2.1 尿液巨细胞病毒DNA检测 具体步骤：在灭菌离心管中加入1000μL干净的尿液，并将离心管置于离心机上以50 r/s的速度离心10 min，分离澄清尿液和尿渣后，往尿渣中注入50μL的DNA提取液，手握紧反应管摇动使提取液和尿渣混合均匀，将其放于达到100 ℃的仪器上进行10 min的干浴，干浴结束后进行5 min的离心操作，操作结束取上层清液进行由广州达安基因诊断有限公司生产的DA-7600 PCR仪扩增操作。扩增的靶区域为患儿巨细胞的AD-169基因组中早期转录调节蛋白IE1基因中的高保守非编码区，并在该区域置入特异性的荧光探针和引物。将取好上清液放到DA-7600 PCR仪及配套的试剂盒的反应管中，然后在扩增仪中进行扩增操作，93 ℃下2 min预变性45 s；
55 ℃ 45 s，10个循环左右；93 ℃ 30 s、45 s，30个循环。操作结束后，将数据输入电脑进行计算和分析，将基因拷贝数/mL作为尿液巨细胞病毒DNA的单位，尿液巨细胞病毒DNA拷贝数/mL超过500表示患儿检测结果为阳性。
1.2.2 血清巨细胞病毒特异性抗体检测 具体步骤：真空管中加入从患儿空腹状态下抽取的2 mL的静脉血液，盖上盖子上下倒置使其充分混合，并将其置于离心机上以50 r/s的速度离心5 min，离心结束后放于低温-80 ℃中备测，使用美国雅培公司生产的化学发光仪进行血清巨细胞病毒特异性抗体检测，检测值index大于0.5时表示患儿检测结果为阳性[2]。
1.2.3 两种方法联合检测 将两种单独检测方式联合对患儿的血清和尿液进行检测，具体步骤同上。
1.2.4 阳性结果判断 尿液巨细胞病毒DNA检测操作结束后，将数据输入电脑进行计算和分析，将基因拷贝数/mL作为尿液巨细胞病毒DNA的单位，尿液巨细胞病毒DNA拷贝数/mL超过500表示患儿检测结果为阳性。血清巨细胞病毒特异性抗体检测时，检测值index大于0.5时表示患儿检测结果为阳性。
1.3 治疗方法 通过两种检测方式检测确诊为巨细胞病毒感染的患儿，采用10 mg/（kg·d）剂量的更昔洛韦进行治疗，服用2周。
1.4 观察指标 比较单一检测及联合检测的检查结果，并对比分析治疗前后患儿尿液巨细胞病毒DNA含量、血清巨细胞病毒特异抗体含量。
1.5 统计学处理 采用PEMS 3.1统计学软件对数据进行分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料的比较采用 字2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两种方法单一检测及联合检测结果比较 尿液巨细胞病毒DNA检测的阳性率、特异性与血清巨细胞病毒特异抗体检测阳性率、特异性比较差异无统计学意义（P>0.05）；联合检测的阳性率、特异性与两种单一检测比较差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。
2.2 治疗前后患儿检测结果比较 治疗前后患儿尿液巨细胞病毒DNA含量比较差异有统计学意义（P<0.05）；治疗前后患儿血清巨细胞病毒特异抗体含量比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
3 讨论
巨细胞病毒（CMV）感染是在婴幼儿时期没有明显的临床表现的一种人类感染性疾病，我国感染率在逐年上升，特别是在发展中国家最多。感染主要发生在婴幼儿期，巨细胞病毒感染的患者无论有无症状都会在其体液中被检测出来。通过检测血清巨细胞病毒特异抗体和尿液巨细胞病毒DNA能对患儿是否被巨细胞病毒感染起到很好的辅助诊断作用。两种检测方式结合在一起检测阳性率高且检测的特异性强，能极大程度地诊断出被巨细胞感染的患儿，及时给予治疗，减少患儿并发症和后遗症的发生，在临床上逐渐被广泛应用。
本研究显示，两种单一检测及联合检测结果比较，尿液巨细胞病毒DNA检测的阳性率58.89%（53/90）、特异性62.22%（56/90）与血清巨细胞病毒特异抗体检测阳性率51.11%（46/90）、特异性61.11%（55/90）比较差异无统计学意义（P>0.05）；联合检测的阳性率78.89%（71/90）、特异性91.11%（82/90）与两种单一检测比较差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗前后患儿检测结果比较，治疗前患儿尿液巨细胞病毒DNA含量（6.11±2.99）拷贝数/mL与治疗后尿液巨细胞病毒DNA含量（2.28±1.12）拷贝数/mL比较差异有统计学意义（P<0.05）；治疗前血清巨细胞病毒特异抗体含量（3.01±0.22）U/mL与治疗后血清巨细胞病毒特异抗体含量（1.32±0.16）U/mL比较差异有统计学意义（P<0.05）。结果表明，两种检测方式在单一进行检测时各自检测的阳性率和特异性无明显差异，但将两种检测方式同时应用，其检测出的阳性率和特异性明显高于单一检测，准确率明显提高，减少了患儿可能引起的并发症和后期可能发生的后遗症，给患儿一个健康的未来，也给患儿的家属减轻不必要的经济负担和精神压力，提高了我国优生优育的质量。
与治疗前相比，患儿治疗后的血清巨细胞病毒特异抗体含量和尿液巨细胞病毒DNA含量均明显下降，表明通过治疗可以治愈患儿的巨细胞感染，早期诊断和早期对患儿进行治疗对患儿治愈有很重要的作用。分析原因：血清巨细胞病毒特异抗体检测的特点是特异性强、灵敏度高、能快速检测、自动化等优点，尿液巨细胞病毒DNA检测可以快速检测并且能建立扩增曲线，能很好地通过曲线检测DNA等优点，进而两种检测方式结合在一起对患儿进行检测时能提高阳性检测率和特异性。巨细胞感染早期患儿临床症状表现不明显，早期检测早期进行治疗，对治愈患儿的巨细胞感染有很重要的意义与袁浩等[17]研究结果相似。
巨细胞病毒是一种传播途径为胎盘或生殖道进行感染等方式的疱疹病毒，绝大部分患儿感染后身体呈亚临床期或潜伏感染期。并且患儿身体内会产生特异性抗体，当抽取患儿空腹时静脉血清单份稀释达到（1/8）以上，通过化学发光法对血清巨细胞病毒特异抗体进行检测时对诊断患儿是否受巨细胞感染有很重要临床应用价值[20]。但是由于患儿机体的免疫能力较弱因而产生的特异性抗体较弱导致检测过程中检测的阳性率较低并且特异性不够灵敏，进而易出现假阴性，使得少数患儿没有被检测出来，特异性虽较强但敏感程度较弱，易导致后期发现的时候治疗起来棘手。对患儿洁净的尿液进行实时荧光定量PCR法（FQ-PCR）时，能对患儿基因的各种表达进行定量分析，可以进行一个点的突变分析及等位基因进行分析，也可以对单核酸的多态性进行分析，但先要在基团置入特异性荧光探针和引物。因而通过实时荧光定量PCR法检测尿液巨细胞病毒DNA时能很好的通过荧光显示，检测是否患儿被巨细胞病毒感染[20]。因体内免疫能力未受抑制时潜伏的病毒未能活化增殖使得检测的阳性率偏低并特异性较弱进而使得检测存在一定的假阴率，造成少数患儿未能被检测出来，错过患儿的早期治疗，增加后期治疗费用。但相比于血清巨细胞病毒特异性抗体检测，尿液检测具有取样便捷、对患儿没有机体创伤等优点。进而两种检测方式联合进行检测时相比于单一检测能提高检测的阳性率且增强特异性，两种检测方式联合检测是临床上检测巨细胞感染的一种较好的方法，值得推广应用。 综上所述，在诊断婴儿巨细胞病毒感染中采用尿液巨细胞病毒DNA联合血清巨细胞病毒特异抗体检测的临床效果理想，早期诊断出来并进行治疗对治疗巨细胞感染具有重要意义，值得推广应用。
参考文献
[1]徐莉莉，牟文凤，杨丽，等.婴儿血液、尿液及母乳中病毒 DNA 检测在诊断人巨细胞病毒感染中的应用[J].中国当代儿科杂志，2013，15（9）：748-750.
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【关键词】 巨细胞病毒； 尿液巨细胞病毒DNA； 血清巨细胞病毒特异抗体； 诊断价值
【Abstract】 Objective：To study the diagnostic value of exploring the use of CMV DNA in urine and serum of CMV-specific antibody detection in the diagnosis of cytomegalovirus infection in infants， to assess its clinical significance.Method：From February 2014 to May 2015 in our hospital received 90 cases of suspected diagnosis of cytomegalovirus infection in infants for the study，they were given the urine CMV DNA and CMV-specific serum antibody detection in children.The results of a single test and combined two detection methods were compared with treatment of children before and after.Result：The positive rate of CMV DNA detection in urine was 58.89% （53/90），specificity was 62.22% （56/90） and specificity of serum antibody positive rate of CMV was 51.11%（46/90），specificity was 61.11%（55/90） showed no significant difference（P>0.05）.The positive rate of CMV DNA in urine and serum of CMV-specific antibody detection was 78.89% （71/90），and specificity was 91.11%（82/90），compared with two single species detection methods detect，the differences were statistically significant（P<0.05）.After treatment，CMV DNA and serum of CMV-specific antibody were lowher than before treatment（P<0.05）.Conclusion：In the diagnosis of infantile cytomegalovirus infection cytomegalovirus DNA over urine and serum antibody detection of CMV-specific clinical results，should be widely applied.
【Key words】 Cytomegalovirus； Urine cytomegalovirus DNA； CMV-specific antibodies in serum； Diagnostic value
First-author’s address：Fanyu District Shawan People’s Hospital of Guangzhou，Guangzhou 511400，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.19.034
巨细胞病毒（CMV）感染是一种人类感染性疾病，在我国感染率在逐年上升。感染主要发生在婴幼儿期，但巨细胞病毒感染的患者无论有无症状都会在其体液中被检测出来[1]。婴幼儿感染时身体系统会发生多处病变，引起严重的并发症，危及患儿的生命。为探索在诊断婴儿巨细胞病毒感染中采用尿液巨细胞病毒DNA联合血清巨细胞病毒特异抗体检测的诊断价值，分析应用价值，本文选取2014年2月-2015年5月收诊的90例疑似巨细胞病毒感染的婴幼儿为研究对象，报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2014年2月-2015年5月本院收诊的90例疑似巨细胞病毒感染的婴幼儿。所有患儿均符合巨细胞病毒感染诊断方案的诊断标准，患儿中男61例，女29例；年龄1～14个月，平均（2.12 ±0.65）个月；本研究经本院伦理委员会批准进行，且家属均已在知情同意书上签字。 1.2 检测方法
1.2.1 尿液巨细胞病毒DNA检测 具体步骤：在灭菌离心管中加入1000μL干净的尿液，并将离心管置于离心机上以50 r/s的速度离心10 min，分离澄清尿液和尿渣后，往尿渣中注入50μL的DNA提取液，手握紧反应管摇动使提取液和尿渣混合均匀，将其放于达到100 ℃的仪器上进行10 min的干浴，干浴结束后进行5 min的离心操作，操作结束取上层清液进行由广州达安基因诊断有限公司生产的DA-7600 PCR仪扩增操作。扩增的靶区域为患儿巨细胞的AD-169基因组中早期转录调节蛋白IE1基因中的高保守非编码区，并在该区域置入特异性的荧光探针和引物。将取好上清液放到DA-7600 PCR仪及配套的试剂盒的反应管中，然后在扩增仪中进行扩增操作，93 ℃下2 min预变性45 s；
55 ℃ 45 s，10个循环左右；93 ℃ 30 s、45 s，30个循环。操作结束后，将数据输入电脑进行计算和分析，将基因拷贝数/mL作为尿液巨细胞病毒DNA的单位，尿液巨细胞病毒DNA拷贝数/mL超过500表示患儿检测结果为阳性。
1.2.2 血清巨细胞病毒特异性抗体检测 具体步骤：真空管中加入从患儿空腹状态下抽取的2 mL的静脉血液，盖上盖子上下倒置使其充分混合，并将其置于离心机上以50 r/s的速度离心5 min，离心结束后放于低温-80 ℃中备测，使用美国雅培公司生产的化学发光仪进行血清巨细胞病毒特异性抗体检测，检测值index大于0.5时表示患儿检测结果为阳性[2]。
1.2.3 两种方法联合检测 将两种单独检测方式联合对患儿的血清和尿液进行检测，具体步骤同上。
1.2.4 阳性结果判断 尿液巨细胞病毒DNA检测操作结束后，将数据输入电脑进行计算和分析，将基因拷贝数/mL作为尿液巨细胞病毒DNA的单位，尿液巨细胞病毒DNA拷贝数/mL超过500表示患儿检测结果为阳性。血清巨细胞病毒特异性抗体检测时，检测值index大于0.5时表示患儿检测结果为阳性。
1.3 治疗方法 通过两种检测方式检测确诊为巨细胞病毒感染的患儿，采用10 mg/（kg·d）剂量的更昔洛韦进行治疗，服用2周。
1.4 观察指标 比较单一检测及联合检测的检查结果，并对比分析治疗前后患儿尿液巨细胞病毒DNA含量、血清巨细胞病毒特异抗体含量。
1.5 统计学处理 采用PEMS 3.1统计学软件对数据进行分析，计量资料以（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料的比较采用 字2检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两种方法单一检测及联合检测结果比较 尿液巨细胞病毒DNA检测的阳性率、特异性与血清巨细胞病毒特异抗体检测阳性率、特异性比较差异无统计学意义（P>0.05）；联合检测的阳性率、特异性与两种单一检测比较差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。
2.2 治疗前后患儿检测结果比较 治疗前后患儿尿液巨细胞病毒DNA含量比较差异有统计学意义（P<0.05）；治疗前后患儿血清巨细胞病毒特异抗体含量比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
3 讨论
巨细胞病毒（CMV）感染是在婴幼儿时期没有明显的临床表现的一种人类感染性疾病，我国感染率在逐年上升，特别是在发展中国家最多。感染主要发生在婴幼儿期，巨细胞病毒感染的患者无论有无症状都会在其体液中被检测出来。通过检测血清巨细胞病毒特异抗体和尿液巨细胞病毒DNA能对患儿是否被巨细胞病毒感染起到很好的辅助诊断作用。两种检测方式结合在一起检测阳性率高且检测的特异性强，能极大程度地诊断出被巨细胞感染的患儿，及时给予治疗，减少患儿并发症和后遗症的发生，在临床上逐渐被广泛应用。
本研究显示，两种单一检测及联合检测结果比较，尿液巨细胞病毒DNA检测的阳性率58.89%（53/90）、特异性62.22%（56/90）与血清巨细胞病毒特异抗体检测阳性率51.11%（46/90）、特异性61.11%（55/90）比较差异无统计学意义（P>0.05）；联合检测的阳性率78.89%（71/90）、特异性91.11%（82/90）与两种单一检测比较差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗前后患儿检测结果比较，治疗前患儿尿液巨细胞病毒DNA含量（6.11±2.99）拷贝数/mL与治疗后尿液巨细胞病毒DNA含量（2.28±1.12）拷贝数/mL比较差异有统计学意义（P<0.05）；治疗前血清巨细胞病毒特异抗体含量（3.01±0.22）U/mL与治疗后血清巨细胞病毒特异抗体含量（1.32±0.16）U/mL比较差异有统计学意义（P<0.05）。结果表明，两种检测方式在单一进行检测时各自检测的阳性率和特异性无明显差异，但将两种检测方式同时应用，其检测出的阳性率和特异性明显高于单一检测，准确率明显提高，减少了患儿可能引起的并发症和后期可能发生的后遗症，给患儿一个健康的未来，也给患儿的家属减轻不必要的经济负担和精神压力，提高了我国优生优育的质量。
与治疗前相比，患儿治疗后的血清巨细胞病毒特异抗体含量和尿液巨细胞病毒DNA含量均明显下降，表明通过治疗可以治愈患儿的巨细胞感染，早期诊断和早期对患儿进行治疗对患儿治愈有很重要的作用。分析原因：血清巨细胞病毒特异抗体检测的特点是特异性强、灵敏度高、能快速检测、自动化等优点，尿液巨细胞病毒DNA检测可以快速检测并且能建立扩增曲线，能很好地通过曲线检测DNA等优点，进而两种检测方式结合在一起对患儿进行检测时能提高阳性检测率和特异性。巨细胞感染早期患儿临床症状表现不明显，早期检测早期进行治疗，对治愈患儿的巨细胞感染有很重要的意义与袁浩等[17]研究结果相似。
巨细胞病毒是一种传播途径为胎盘或生殖道进行感染等方式的疱疹病毒，绝大部分患儿感染后身体呈亚临床期或潜伏感染期。并且患儿身体内会产生特异性抗体，当抽取患儿空腹时静脉血清单份稀释达到（1/8）以上，通过化学发光法对血清巨细胞病毒特异抗体进行检测时对诊断患儿是否受巨细胞感染有很重要临床应用价值[20]。但是由于患儿机体的免疫能力较弱因而产生的特异性抗体较弱导致检测过程中检测的阳性率较低并且特异性不够灵敏，进而易出现假阴性，使得少数患儿没有被检测出来，特异性虽较强但敏感程度较弱，易导致后期发现的时候治疗起来棘手。对患儿洁净的尿液进行实时荧光定量PCR法（FQ-PCR）时，能对患儿基因的各种表达进行定量分析，可以进行一个点的突变分析及等位基因进行分析，也可以对单核酸的多态性进行分析，但先要在基团置入特异性荧光探针和引物。因而通过实时荧光定量PCR法检测尿液巨细胞病毒DNA时能很好的通过荧光显示，检测是否患儿被巨细胞病毒感染[20]。因体内免疫能力未受抑制时潜伏的病毒未能活化增殖使得检测的阳性率偏低并特异性较弱进而使得检测存在一定的假阴率，造成少数患儿未能被检测出来，错过患儿的早期治疗，增加后期治疗费用。但相比于血清巨细胞病毒特异性抗体检测，尿液检测具有取样便捷、对患儿没有机体创伤等优点。进而两种检测方式联合进行检测时相比于单一检测能提高检测的阳性率且增强特异性，两种检测方式联合检测是临床上检测巨细胞感染的一种较好的方法，值得推广应用。 综上所述，在诊断婴儿巨细胞病毒感染中采用尿液巨细胞病毒DNA联合血清巨细胞病毒特异抗体检测的临床效果理想，早期诊断出来并进行治疗对治疗巨细胞感染具有重要意义，值得推广应用。
参考文献
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