【摘 要】
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目的探讨mTOR抑制剂雷帕霉素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学特性的影响和自噬的作用，以及其对mTOR信号通路和自噬相关非编码RNA表达的调控。方法以瘢痕疙瘩成纤维细胞为实验模型，经浓度为10、50、100 nmol/L的雷帕霉素处理后，釆用MTS法检测细胞增殖；应用流式细胞仪检测细胞凋亡；透射电镜观察自噬体形成情况，Western Blot检测自噬相关蛋白LC3的表达；实时荧光定量PCR检测
【机 构】
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100144 北京，中国医学科学院整形外科医院研究中心,100144 北京，中国医学科学院整形外科医院研究中心,100144 北京，中国医学科学院整形外科医院研究中心,100144 北京，中国医学科学
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目的探讨mTOR抑制剂雷帕霉素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学特性的影响和自噬的作用，以及其对mTOR信号通路和自噬相关非编码RNA表达的调控。
方法以瘢痕疙瘩成纤维细胞为实验模型，经浓度为10、50、100 nmol/L的雷帕霉素处理后，釆用MTS法检测细胞增殖；应用流式细胞仪检测细胞凋亡；透射电镜观察自噬体形成情况，Western Blot检测自噬相关蛋白LC3的表达；实时荧光定量PCR检测细胞外基质相关基因、mTOR信号通路基因、自噬相关非编码RNA的表达。
结果雷帕霉素各浓度处理组的成纤维细胞吸光度A的比值与对照组相比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。同时，下调其细胞外基质相关基因collagen-1、α-SMA和Fibronectin的mRNA表达(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示，雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡无明显诱导作用(P>0.05)。透射电镜观察发现，瘢痕疙瘩成纤维细胞中可见自噬小体的双层膜结构，并伴有自噬相关蛋白LC3的表达增加；mTOR通路下游基因4EBP1和p70S6K的表达均有下调；同时，自噬相关miRNA(miR-885-3p、miR-204、miR-101、miR-376b)和lncRNA FLJ11812表达增加，而miR-30a、lncRNA HULC表达减少(P<0.05)。
结论雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长具有抑制作用，对其凋亡无显著影响，但可以通过抑制mTOR信号通路的活化以及调控自噬相关非编码RNA的表达，激活其自噬的发生。
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