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[摘要] 目的 通过实时RT-PCR方法检测经定向诱导分化的表皮干细胞分子生物学特性,探讨干细胞疗法用于眼表重建的可行性。方法 实验组细胞以结膜上皮细胞为饲养细胞进行共培养,并设立空白对照组细胞培养相同时间,分别于第1、3、5、7天取各组细胞提取RNA进行实时RT-PCR定量检测β2-微球蛋白、角蛋白K13基因的表达水平。结果 实验组细胞共同培养3d后出现β2-微球蛋白、角蛋白K13基因的表达,第5、7天的表达量显著提高(P<0.01)。结论 经本实验方法定向诱导分化后表皮干细胞可表达与正常结膜上皮细胞相类似的分子生物学特征。
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1.2.3表皮干细胞与结膜上皮细胞共培养的诱导分化取1~2代表皮干细胞作为实验细胞,以5×106个/mL接种于6孔Transwell培养板中,实验组insert池中加入1mL结膜上皮细胞(细胞浓度为1×104个/mL)作为饲养细胞;对照组insert池中仅为相同体积的上皮细胞培养液,5% CO2、37℃细胞培养箱培养1、3、5、7d后,弃细胞培养液,分别取对照组和实验组细胞提取RNA,进行实时定量RT-PCR检测目的基因β2-微球蛋白、角蛋白K13的表达情况。
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[4] 孟繁剑,陈家祺. 人皮肤干细胞体外诱导分化构建人工结膜的实验[J]. 中山大学学报(医学科学版),2006,27(3):246-249.
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