探讨携带人血管内皮生长因子165基因的重组腺病毒(Ad-hVEGF165)对经同型半胱氨酸(Hcy)损伤的内皮细胞的作用及机制。
方法不同浓度Hcy(0、0.05和1.00 mmol/L)刺激人脐静脉内皮细胞CRL-1730 24 h后,分别加入Hcy、空载体重组腺病毒Ad-Track和Ad-hVEGF165作用48 h(分为9组,包括空白组、Hcy0.05组、Hcy1.00组、Ad-Track组、Hcy0.05+Ad-Track组、Hcy1.00+Ad-Track组、Ad-hVEGF165组、Hcy0.05+Ad-hVEGF165组、Hcy1.00+Ad-hVEGF165组),采用实时荧光定量PCR和Western blot半定量分析细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)2的mRNA和蛋白相对表达量,二者mRNA和蛋白表达的相关性采用Pearson相关分析。
结果Hcy0.05组和Hcy0.05+Ad-hVEGF165组eNOS的mRNA和蛋白表达均分别低于空白组和Ad-hVEGF165组(P均<0.05)。Hcy0.05组、Hcy1.00组与空白组相比,Hcy0.05+Ad-Track组、Hcy1.00+Ad-Track组与Ad-Track组相比,Hcy0.05+Ad-hVEGF165组、Hcy1.00+ Ad-hVEGF165组与Ad-hVEGF165组相比,细胞内的DDAH2 mRNA和蛋白表达均较低(P均<0.05)。Ad-hVEGF165组与空白组、Ad-Track组相比,Hcy0.05+Ad-hVEGF165组与Hcy0.05组、Hcy0.05+Ad-Track组相比,Hcy1.00+Ad-hVEGF165组与Hcy1.00组、Hcy1.00+Ad-Track组相比,DDAH2 mRNA和蛋白表达均较高(P均<0.05)。Pearson相关分析显示,Hcy损伤内皮细胞后DDAH2与eNOS的mRNA及蛋白表达均不相关(r值分别为0.057和0.449,P均>0.05);在外源性血管内皮生长因子作用下,DDAH2与eNOS的mRNA和蛋白表达也均不相关(r值分别为0.284和0.432,P均>0.05)。
结论Ad-hVEGF165调控一氧化氮系统功能,是其逆转Hcy导致的内皮细胞损伤的可能作用机制之一。