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【摘要】目的：探讨胆清胶囊中牛胆汁和凤尾草的薄层色谱鉴别方法。方法：采用薄层色谱法。结果：薄层色谱鉴别斑点清晰，阴性对照无干扰。结论：该方法简便、准确、重复性好，可用于胆清胶囊中牛胆汁和凤尾草的薄层色谱鉴别。
【关键词】胆清胶囊；牛胆汁；凤尾草；薄层色谱鉴别
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）05-0035-02
胆清胶囊由虎耳草、凤尾草、大黄、牛胆汁等四味药材组方，具有清热利湿、舒肝利胆的功效，临床主要用于肝胆湿热所致的脘肋疼痛、呃逆呕恶、口干口苦、大便秘结、以及胆囊炎、胆石症见上述证候者[1]。在实验中发现现行标准中牛胆汁和凤尾草的薄层色谱鉴别[1]，斑点不清晰，分离度不好，而且现行标准中凤尾草的薄层鉴别所使用的展开剂中含有剧毒化学物质苯，对检验人员危害大。笔者通过深入研究，对牛胆汁和凤尾草的薄层色谱鉴别方法进行了改进，使得斑点清晰，分离度好，且阴性无干扰，改进了该品种的质量标准，建立了可用于胆清胶囊质量控制的新的薄层色谱鉴别方法。
1仪器与材料
11仪器超声波清洗器（北京医疗设备厂，功率250W，频率33kHz）；电子分析天平（梅特勒XPE205）；薄层色谱硅胶G（青岛海洋化工有限公司）。
12材料胆酸（批号：100078-201415）、木犀草素（批号：111520-200504）购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯、水为超纯水，其他试剂为分析纯。样品由厂家提供，阴性样品自制。
2方法与结果
21牛胆汁的薄层色谱鉴别取本品内容物15g，加甲醇20mL，超声处理20min，滤过，弃掉滤液，滤渣挥干溶剂，加入三氯甲烷20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液，另取胆酸对照品，加乙醇制成1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（3∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点。结果表明，样品斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，方法具有专属性。见图1。
22凤尾草的薄层色谱鉴别取本品内容物2g，加75%乙醇50mL，超声处理45min，滤过，滤液蒸干，殘渣依次用石油醚（60～90℃）、二氯甲烷各5mL，分别浸渍5min，弃去石油醚（60～90℃）液与二氯甲烷液，挥干，残渣加水5mL使溶解，以2000r/min的速度离心5min，取上清液通过AB-8大孔吸附树脂（50g，湿法装柱，内径为15cm），用水120mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇120mL洗脱，弃去洗脱液，继用75%乙醇70mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取木犀草素对照品，加甲醇制成1mL含02mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液3μL、对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸（8∶9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数min， 置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。同时，3批样品斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，方法具有专属性。见图2。
23温度的考察对室温、低温（5℃）和高温（40℃）进行了考察，结果展开温度为室温、5℃和40℃时，供试品色谱中，在与对照药材色谱色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，表明不同温度展开条件对本试验建立的方法无明显影响。
24湿度的考察对高湿度（88%）、中等湿度（47%）和低湿度（32%）进行了考察，结果在展开温度为室温、湿度分别为88%、47%和32%时，供试品色谱中，在与对照药材色谱色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，表明不同湿度展开条件对本试验建立的方法无明显影响。
25 薄层板的考察选用青岛海洋化工厂分厂硅胶G预制板（批号20100702），自制硅胶G板2种薄层板，斑点清晰，阴性无干扰，表明不同薄层板展开对本试验建立的方法无明显影响。
3讨论
实验过程中根据胆酸的性质，曾使用乙酸乙酯-三氯甲烷-冰醋酸（25∶25∶02）、乙酸乙酯-甲醇-稀乙酸（5∶3∶2）、异辛烷-乙酸乙酯-冰乙酸（15∶7∶5）、三氯甲烷-乙醚-冰乙酸（4∶5∶1）、三氯甲烷-乙醚-冰乙酸（2∶2∶1）、正己烷-乙酸乙酯-冰乙酸-甲醇（6∶32∶1∶1）等展开系统，经过反复试验，最后采用本研究所使用的展开系统，结果斑点清晰，分离效果最优。
文献表明凤尾草主要含黄酮类有效成分[2]，本文采用AB-8大孔吸附树脂对凤尾草醇提物中黄酮类成分进行纯化后，再进行薄层色谱鉴别，使得斑点清晰，分离度更好。
由于凤尾草薄层鉴别现行标准中的展开系统含有苯，对检验人员有很大的危害，本文通过反复试验，曾使用了三氯甲烷-甲醇-乙酸（6∶1∶1）、三氯甲烷-甲醇-甲酸（5∶2∶02）、环己烷-乙酸乙酯-甲酸（10∶5∶2）、环己烷-乙酸丁酯-乙酸（15∶5∶04）等展开系统，最后采用本文方法所使用的展开系统，结果斑点清晰，分离效果最优，阴性无干扰。
综上，研究在原标准的基础上，改进了牛胆汁和凤尾草的薄层色谱鉴别方法，以使质控标准更趋完善，更有效控制了胆清胶囊的质量。
参考文献
[1] WS-10049（ZD-0049）-2002-2011Z .国家药品标准[S].
[2] 刘建群，刘健，蒋伟，等.凤尾草药材质量标准研究[J].中国中药杂志，2015，40（10）：1855-1859.
【关键词】胆清胶囊；牛胆汁；凤尾草；薄层色谱鉴别
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2017）05-0035-02
胆清胶囊由虎耳草、凤尾草、大黄、牛胆汁等四味药材组方，具有清热利湿、舒肝利胆的功效，临床主要用于肝胆湿热所致的脘肋疼痛、呃逆呕恶、口干口苦、大便秘结、以及胆囊炎、胆石症见上述证候者[1]。在实验中发现现行标准中牛胆汁和凤尾草的薄层色谱鉴别[1]，斑点不清晰，分离度不好，而且现行标准中凤尾草的薄层鉴别所使用的展开剂中含有剧毒化学物质苯，对检验人员危害大。笔者通过深入研究，对牛胆汁和凤尾草的薄层色谱鉴别方法进行了改进，使得斑点清晰，分离度好，且阴性无干扰，改进了该品种的质量标准，建立了可用于胆清胶囊质量控制的新的薄层色谱鉴别方法。
1仪器与材料
11仪器超声波清洗器（北京医疗设备厂，功率250W，频率33kHz）；电子分析天平（梅特勒XPE205）；薄层色谱硅胶G（青岛海洋化工有限公司）。
12材料胆酸（批号：100078-201415）、木犀草素（批号：111520-200504）购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯、水为超纯水，其他试剂为分析纯。样品由厂家提供，阴性样品自制。
2方法与结果
21牛胆汁的薄层色谱鉴别取本品内容物15g，加甲醇20mL，超声处理20min，滤过，弃掉滤液，滤渣挥干溶剂，加入三氯甲烷20mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液，另取胆酸对照品，加乙醇制成1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸乙酯-冰醋酸（3∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点。结果表明，样品斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，方法具有专属性。见图1。
22凤尾草的薄层色谱鉴别取本品内容物2g，加75%乙醇50mL，超声处理45min，滤过，滤液蒸干，殘渣依次用石油醚（60～90℃）、二氯甲烷各5mL，分别浸渍5min，弃去石油醚（60～90℃）液与二氯甲烷液，挥干，残渣加水5mL使溶解，以2000r/min的速度离心5min，取上清液通过AB-8大孔吸附树脂（50g，湿法装柱，内径为15cm），用水120mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇120mL洗脱，弃去洗脱液，继用75%乙醇70mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取木犀草素对照品，加甲醇制成1mL含02mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液3μL、对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸（8∶9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数min， 置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。同时，3批样品斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，方法具有专属性。见图2。
23温度的考察对室温、低温（5℃）和高温（40℃）进行了考察，结果展开温度为室温、5℃和40℃时，供试品色谱中，在与对照药材色谱色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，表明不同温度展开条件对本试验建立的方法无明显影响。
24湿度的考察对高湿度（88%）、中等湿度（47%）和低湿度（32%）进行了考察，结果在展开温度为室温、湿度分别为88%、47%和32%时，供试品色谱中，在与对照药材色谱色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，且斑点清晰，分离度好，阴性无干扰，表明不同湿度展开条件对本试验建立的方法无明显影响。
25 薄层板的考察选用青岛海洋化工厂分厂硅胶G预制板（批号20100702），自制硅胶G板2种薄层板，斑点清晰，阴性无干扰，表明不同薄层板展开对本试验建立的方法无明显影响。
3讨论
实验过程中根据胆酸的性质，曾使用乙酸乙酯-三氯甲烷-冰醋酸（25∶25∶02）、乙酸乙酯-甲醇-稀乙酸（5∶3∶2）、异辛烷-乙酸乙酯-冰乙酸（15∶7∶5）、三氯甲烷-乙醚-冰乙酸（4∶5∶1）、三氯甲烷-乙醚-冰乙酸（2∶2∶1）、正己烷-乙酸乙酯-冰乙酸-甲醇（6∶32∶1∶1）等展开系统，经过反复试验，最后采用本研究所使用的展开系统，结果斑点清晰，分离效果最优。
文献表明凤尾草主要含黄酮类有效成分[2]，本文采用AB-8大孔吸附树脂对凤尾草醇提物中黄酮类成分进行纯化后，再进行薄层色谱鉴别，使得斑点清晰，分离度更好。
由于凤尾草薄层鉴别现行标准中的展开系统含有苯，对检验人员有很大的危害，本文通过反复试验，曾使用了三氯甲烷-甲醇-乙酸（6∶1∶1）、三氯甲烷-甲醇-甲酸（5∶2∶02）、环己烷-乙酸乙酯-甲酸（10∶5∶2）、环己烷-乙酸丁酯-乙酸（15∶5∶04）等展开系统，最后采用本文方法所使用的展开系统，结果斑点清晰，分离效果最优，阴性无干扰。
综上，研究在原标准的基础上，改进了牛胆汁和凤尾草的薄层色谱鉴别方法，以使质控标准更趋完善，更有效控制了胆清胶囊的质量。
参考文献
[1] WS-10049（ZD-0049）-2002-2011Z .国家药品标准[S].
[2] 刘建群，刘健，蒋伟，等.凤尾草药材质量标准研究[J].中国中药杂志，2015，40（10）：1855-1859.