【摘 要】
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目的 建立提取单增李斯特菌膜囊泡(Listeria monocytogenes membrane vesicles,LM-MVs)的方法,对LM-MVs表征及诱导固有免疫应答的能力进行分析,为LM-MVs作为疫苗载体和药物递
【机 构】
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四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院卫生检验与检疫系,四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院公共卫生与预防医学实验中心
【基金项目】
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四川省科技厅重点研发项目(No.21ZDYF1137)资助。
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目的 建立提取单增李斯特菌膜囊泡(Listeria monocytogenes membrane vesicles,LM-MVs)的方法,对LM-MVs表征及诱导固有免疫应答的能力进行分析,为LM-MVs作为疫苗载体和药物递送平台的研究奠定基础.方法 通过培养→离心→过滤→超滤浓缩→超速离心的方法提取单增李斯特菌分泌的膜囊泡,通过透射电子显微镜观察其形态特征,通过动态光散射分析测量其粒径分布,采用SDS-PAGE和Western blot分析其蛋白表达情况,采用CCK-8细胞增殖与毒性实验分析其对固有免疫细胞增殖能力的影响,采用实时荧光定量PCR对其刺激的固有免疫应答进行分析.结果 成功建立提取LM-MVs的方法.透射电子显微镜下,LM-MVs呈现近圆形的膜状结构,动态光散射分析显示其大小为65~190 nm.SDS-PAGE和Western blot结果表明LM-MVs含有单增李斯特菌溶血素等蛋白.CCK-8细胞增殖与毒性实验中,10、20和50μg/mL的LM-MVs干预小鼠树突状细胞(DC 2.4)24 h后的增殖指数均高于未干预的DC 2.4细胞(P<0.05);0.1、1、10、20和50μg/mL的LM-MVs干预小鼠巨噬细胞(Raw 264.7)24 h后的增殖指数均高于未干预的Raw 264.7细胞(P<0.01).实时荧光定量PCR结果显示,50μg/mL的LM-MVs干预Raw 264.7细胞后肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6和IL-10的表达量均高于未干预对照(P<0.05).结论 本研究建立的方法能够提取出单增李斯特菌分泌的膜囊泡,提取的LM-MVs直径为65~190 nm近圆形膜状结构,能分泌多种蛋白组分,能刺激固有免疫应答.
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