【摘 要】
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目的:克隆人桥粒芯胶蛋白3前导肽(Dc3p)基因,并进行表达、纯化和鉴定.方法:用PCR法从桥粒芯胶蛋白(Dc)cDNA文库中扩增出Dc3p基因,与pGEX-4T-2载体连接成重组表达质粒pGEX-4T-
【机 构】
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东南大学附属中大医院,南京医科大学,英国蔓彻斯特大学
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目的:克隆人桥粒芯胶蛋白3前导肽(Dc3p)基因,并进行表达、纯化和鉴定.方法:用PCR法从桥粒芯胶蛋白(Dc)cDNA文库中扩增出Dc3p基因,与pGEX-4T-2载体连接成重组表达质粒pGEX-4T-2/Dc3p;重组质粒转入BL21大肠杆菌,经诱导表达谷胱甘肽S-转移酶-Dc3p(GST-Dc3p)融合蛋白,该蛋白经Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE和免疫印迹法检测鉴定.结果:经酶切及序列分析鉴定,重组质粒pGEX-4T-2/Dc3p成功构建,诱导后高表达GST-Dc3p融合蛋白并得到纯化,免疫印迹法证实表达蛋白为GST-Dc3p.结论:获得高表达、高纯度的GST-Dc3p融合蛋白,为Dc3p的功能及免疫学分析打下基础.
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