论文部分内容阅读
目的将单链抗体基因插入单嗜性逆转录病毒胞膜蛋白,以构建能靶向感染肿瘤细胞的逆转录病毒载体。方法 构建单链抗体融合表达质粒PET20b-scFv,通过酶联免疫分析,Western blot检测基因工程单链抗体的抗原结合活性。利用PCR定点突变技术,在野生型MoMulv胞膜蛋白上的SU亚单位氨基末端产生合适的酶切位点,插入体外构建,证实具有抗原亲合活性的抗人脑胶质瘤细胞膜抗原的单链抗体基因,并构建利用CMV启动子高效表达胞膜蛋白-单链抗体融合基因的表达质粒,转染Ψ2包装细胞后,以lac-z为报告基因,包装出重组逆转录病毒,进行病毒结合实验,感染实验。结果 酶联免疫分析,Western blot 结果证实基因工程单链抗体能与肿瘤细胞表面相应抗原结合,病毒结合实验,感染实验,结果证明所构建嵌合型逆转录病毒能改变其嗜性,由仅感染鼠细胞到特异性感染人脑胶质瘤细胞,且这种作用能为特异性单克隆抗体阻断。结论 利用单链抗体修饰单嗜性逆转录病毒胞膜蛋白的SU亚单位能达到选择性感染肿瘤细胞的目的。