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【摘 要】 目的：研究苗藥三两银（Sarcococcahookeriana）的生物碱类成分。方法：采用溶剂提取、各种色谱分离技术进行化合物纯化，通过波谱数据对单体化合物进行结构鉴定。结果：分离鉴定了三个化合物，均为孕甾烷生物碱，分别为：Pachyaximine （A） （1）、（20S）-20-（N，N-dimethylamino）-16α，17α-epoxy-3β- methoxy-pregn-5-ene （2）、（2α，3β，4β，20S）-2，4-bis（acetoxy）-20-（N，N-dimethylamino）- 3-[（3-methylbut-2-enoyl）amino]-5α-pregnane （3）。结论：三个化合物均为首次从苗药三两银中分离得到。
【关键词】 苗药；三两银；化学成分；孕甾烷生物碱
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2018）02-0039-03
Abstract：Objective To study the chemical constituents from Miao medicine SarcococcahookerianaLindl. Method The chemical constituents from S. hookeriana were isolated by solvent extraction and chromatographic separation technology. Structures of obtained compounds were elucidated by modern spectroscopy. Results Three known steroidal alkaloids were isolated and identified as Pachyaximine （A） （1）， （20S）-20-（N，N-dimethylamino）-16α，17α-epoxy-3β-methoxy-pregn-5-ene （2）， and （2α，3β，4β，20S）-2，4-bis（acetoxy）-20-（N，N-dimethylamino）-3-[（3-methylbut-2-enoyl）amino]-5α-pregnane （3）. Conclusion All the compounds were isolated from this plant for the first time.
Keywords：Miao medicine； Sarcococcahookeriana； Chemicalconstitutents； Pregnane-type Steroidal Alkaloids
羽脉野扇花（Lindl Sarcococcahookeriana.）为黄杨科（Buxaceae）野扇花属植物，常绿灌木。本属约有20种，分布于亚洲东部和南部，我国已知有8种及几个变种[1]，是传统的民族民间用药。羽脉野扇花和野扇花（S. ruscifolia Stap）同为贵州苗族民间习用药材，常混用，又名三两银、三两金、羊不食等，用于治疗胃溃疡、胃痛、腹泻、发热、咽喉痛、跌打损伤、脑憨症等疾病[2-3]。野扇花属植物的化学成分研究始于上世纪60年代，从中发现大量孕甾烷生物碱，以及三萜、甾体、糖苷等类型化合物。迄今已从该属植物中分离得到100余个孕甾烷生物碱[4]，它们中的大多数化合物因具有明显的胆碱酯酶抑制活性而受到各国学者的广泛关注[5-9]，有望从中发现新的治疗阿尔茨海默病的先导化合物。从羽脉野扇花中还分离到一系列具有抗利什曼虫[10-12]、抗疟原虫[9]、抗菌[11-12]、细胞毒[13-14]、抗炎[15]、免疫抑制[16]及促雌激素生成[17]等活性的成分。本课题组前期对野扇花和羽脉野扇花中的化学成分进行了初步研究，并对研究成果做了相关的文献报道[18，19]。为了深入研究该属植物的活性成分，课题组继续对黔产羽脉野扇花的生物碱成分进行了分离研究。
1 仪器与材料
1.1 仪器 JEOL ECX-400导核磁共振谱仪（日本电子株式会社）；R-215型旋转蒸发仪（瑞士步琦）；ZF-2型紫外光谱仪（上海安亭电子仪器厂）；RE-5210旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-DⅢ型多用真空泵（郑州华仪器有限责任公司）；SK8210HP超声仪（上海科导超声仪器有限公司）。
1.2 材料 层析硅胶：（200-300目、300-400目）青岛海洋化工有限公司；显色剂：改良碘化铋甲试剂；其它试剂均为国产分析纯。
实验药材于2015年7月采于贵州省赫章县韭菜坪，由贵阳中医学院赵能武教授鉴定为羽脉野扇花（Baill Sarcococcahookeriana.）。
2 提取分离
羽脉野扇花根茎（14.5 kg）自然干燥后粉碎，用95%甲醇超声提取四次，提取液减压回收溶剂，浓缩后得总提取物。总提取物用1% H2SO4溶液调pH到1，乙酸乙酯萃取除去脂溶性杂质，剩余酸水液用饱和Na2CO3溶液调pH至9，二氯甲烷萃取得总生物碱156 g。总生物碱进行硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（100∶0→5∶1）梯度洗脱，薄层层析检测，分为A-E五个部分。A部分进行硅胶柱层析，石油醚-二氯甲烷-二乙胺（100∶1∶1→5∶1∶1）梯度洗脱，分为A1-A5五个部分。A1部分通过反复硅胶柱层析（分别以石油醚-二氯甲烷-二乙胺和二氯甲烷-甲醇为洗脱系统）得化合物1（188 mg）和2（76 mg）。B部分进行硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（100∶1→10∶1）梯度洗脱，分为B1-B3三个部分。B3部分通过反复硅胶柱层析（分别以石油醚-二氯甲烷-二乙胺和二氯甲烷-甲醇为洗脱系统）得化合物3（46 mg）。 3 结构鉴定
化合物1白色细针状晶体，易溶于氯仿，改良碘化铋钾显色剂显色呈橘红色。1H-NMR （CDCl3， 400MHz） δ： 5.36 （m， 1H， H-6）， 3.36 （s， 3H， OCH3）， 3.07 （tt， J = 11.3， 4.5 Hz， 1H， H-3）， 2.17 （s， 3H， NMe2）， 1.00 （s， 3H， H-19）， 0.88 （d， J = 6.4 Hz， 3H， H-21）， 0.68 （s， 3H， H-18）. 13C NMR （CDCl3， 100MHz） δ： 140.8 （C-5）， 121.6 （C-6）， 80.3 （C-3）， 61.1 （C-20）， 56.9 （C-14）， 55.6 （OMe）， 54.7 （C-17）， 50.1 （C-9）， 41.4 （C-13）， 39.9 （NMe2）， 39.5 （C-12）， 38.6 （C-4）， 37.2 （C-1）， 36.9 （C-10）， 31.9 （C-8）， 31.8 （C-7）， 28.0 （C-2）， 27.7 （C-16）， 24.1 （C-15）， 21.1 （C-11）， 19.4 （C-19）， 12.1 （C-18）， 9.8 （C-21）。以上数据与文献[20]报道的NMR数据基本一致，故鉴定化合物1为Pachyaximine （A）。
化合物2 无色细针状晶体，易溶于氯仿，改良碘化铋钾显色剂显色呈橘红色。H-NMR （CDCl3， 400MHz） δ：5.35 （m， 1H， H-6）， 3.61 （s， 1H，H-16）， 3.35 （s， 3H，OMe），3.06 （tt， J = 11.3， 4.5 Hz， 1H，H-3），2.89 （d， J= 6.4 Hz， 1H，H-20）， 2.28 （s， 6H，NMe2），1.01 （s， 3H，H-19）， 0.91 （s， 3H，H-18），1.17 （d，J =6.7 Hz， 3H， H-21）. 13C-NMR （CDCl3， 100MHz） δ：141.1（C-5）， 121.4（C-6）， 80.3（C-3）， 73.6（C-17）， 61.1（C-16）， 56.0（C-20）， 55.8（OMe）， 50.5（C-9）， 45.6（C-14）， 43.2（NMe2）， 42.1（C-13）， 38.8（C-4）， 37.2（C-10）， 37.2（C-1）， 32.9（C-12）， 31.7（C-7）， 30.4（C-8）， 28.1（C-2）， 27.4（C-15）， 20.8（C-11）， 19.5（C-19）， 15.8（C-18）， 13.6（C-21）。以上數据与文献[17]报道的NMR数据基本一致，故鉴定化合物2为（20S）-20-（N，N-dimethylamino）-16α，17α-epoxy-3β-methoxy-pregn-5-ene。
化合物3白色细针状晶体易溶于氯仿，改良碘化铋钾显色剂显色呈橘红色。H-NMR（CDCl3，400MHz）δ： 5.62 （d，J=8.9 Hz， 1H，NH），5.50（s，1H，H-2′），5.26（t，J=2.8Hz，1H，H-4），5.11（d，J=3.6Hz，1H，H-2），4.32（dt，J=8.4，4.0Hz，1H，H-3），2.46（t，J=8.6Hz，1H），2.10（s，3H，MeCO），2.08（s，3H，MeCO），1.12（s，3H，H-19），0.89（d，J=6.5Hz，3H，H-21），0.63（s，3H，H-18）. 13C-NMR （CDCl3，100MHz）δ：170.7（MeCO）， 170.5（MeCO）， 166.1（C-1′）， 152.2（C-3′）， 118.1（C-2′）， 74.2（C-4）， 72.0（C-2）， 61.4（C-20）， 56.4 （C-9）， 55.7（C-17）， 49.3（C-3）， 48.8（C-5）， 41.8（C-13）， 40.9（C-1）， 39.9（NMe2）， 39.6（C-12）， 34.9（C-8）， 34.8（C-10）， 31.8（C-7）， 27.7（C-16）， 27.3（C-6）， 25.2（C-15）， 24.1（C-5′）， 21.5（C-11）， 21.2（MeCO）， 20.7（MeCO）， 20.0（C-4′）， 15.4（C-19）， 12.4（C-18），10.1（C-21）。以上数据与文献[21]报道的NMR数据基本一致，故鉴定化合物3为（2α，3β，4β，20S）-2，4-bis（acetoxy）-20-（N，N-dimethylamino）-3-[（3-methylbut-2-enoyl）amino]-5α-pregnane。
4 讨论
野扇花属植物在贵州省资源丰富，民间使用广泛，国外学者从该属植物中分离出大量的孕甾烷生物碱，然而关于该属植物的化学成分研究，国内报道较少。本实验从黔产苗药三两银中分离鉴定了3个孕甾烷生物碱，分别为Pachyaximine （A） （1）、（20S）-20-（N，N-dimethylamino）-16α，17α-epoxy-3β- methoxy-pregn-5-ene （2）、（2α，3β，4β，20S）-2，4-bis（acetoxy）-20-（N，N-dimethylamino）-3-[（3-methylbut-2-enoyl）amino]-5α-pregnane （3），化合物结构见图1。3个化合物均为首次从该植物中分离得到。
苗族人民在长期与疾病斗争的过程中形成了独特的诊疗体系，在治疗外伤和一些地方性多发病方面往往有独到的效果。课题组在民间调研时发现野扇花属植物在苗族民间广泛应用于治疗胃肠溃疡、脑憨症等疾病。结合三两银在民间医药中的应用，本实验对其进行系统的化学成分和生物活性研究，为合理开发苗药三两银的药用价值提供理论基础。 参考文献
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【关键词】 苗药；三两银；化学成分；孕甾烷生物碱
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2018）02-0039-03
Abstract：Objective To study the chemical constituents from Miao medicine SarcococcahookerianaLindl. Method The chemical constituents from S. hookeriana were isolated by solvent extraction and chromatographic separation technology. Structures of obtained compounds were elucidated by modern spectroscopy. Results Three known steroidal alkaloids were isolated and identified as Pachyaximine （A） （1）， （20S）-20-（N，N-dimethylamino）-16α，17α-epoxy-3β-methoxy-pregn-5-ene （2）， and （2α，3β，4β，20S）-2，4-bis（acetoxy）-20-（N，N-dimethylamino）-3-[（3-methylbut-2-enoyl）amino]-5α-pregnane （3）. Conclusion All the compounds were isolated from this plant for the first time.
Keywords：Miao medicine； Sarcococcahookeriana； Chemicalconstitutents； Pregnane-type Steroidal Alkaloids
羽脉野扇花（Lindl Sarcococcahookeriana.）为黄杨科（Buxaceae）野扇花属植物，常绿灌木。本属约有20种，分布于亚洲东部和南部，我国已知有8种及几个变种[1]，是传统的民族民间用药。羽脉野扇花和野扇花（S. ruscifolia Stap）同为贵州苗族民间习用药材，常混用，又名三两银、三两金、羊不食等，用于治疗胃溃疡、胃痛、腹泻、发热、咽喉痛、跌打损伤、脑憨症等疾病[2-3]。野扇花属植物的化学成分研究始于上世纪60年代，从中发现大量孕甾烷生物碱，以及三萜、甾体、糖苷等类型化合物。迄今已从该属植物中分离得到100余个孕甾烷生物碱[4]，它们中的大多数化合物因具有明显的胆碱酯酶抑制活性而受到各国学者的广泛关注[5-9]，有望从中发现新的治疗阿尔茨海默病的先导化合物。从羽脉野扇花中还分离到一系列具有抗利什曼虫[10-12]、抗疟原虫[9]、抗菌[11-12]、细胞毒[13-14]、抗炎[15]、免疫抑制[16]及促雌激素生成[17]等活性的成分。本课题组前期对野扇花和羽脉野扇花中的化学成分进行了初步研究，并对研究成果做了相关的文献报道[18，19]。为了深入研究该属植物的活性成分，课题组继续对黔产羽脉野扇花的生物碱成分进行了分离研究。
1 仪器与材料
1.1 仪器 JEOL ECX-400导核磁共振谱仪（日本电子株式会社）；R-215型旋转蒸发仪（瑞士步琦）；ZF-2型紫外光谱仪（上海安亭电子仪器厂）；RE-5210旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ-DⅢ型多用真空泵（郑州华仪器有限责任公司）；SK8210HP超声仪（上海科导超声仪器有限公司）。
1.2 材料 层析硅胶：（200-300目、300-400目）青岛海洋化工有限公司；显色剂：改良碘化铋甲试剂；其它试剂均为国产分析纯。
实验药材于2015年7月采于贵州省赫章县韭菜坪，由贵阳中医学院赵能武教授鉴定为羽脉野扇花（Baill Sarcococcahookeriana.）。
2 提取分离
羽脉野扇花根茎（14.5 kg）自然干燥后粉碎，用95%甲醇超声提取四次，提取液减压回收溶剂，浓缩后得总提取物。总提取物用1% H2SO4溶液调pH到1，乙酸乙酯萃取除去脂溶性杂质，剩余酸水液用饱和Na2CO3溶液调pH至9，二氯甲烷萃取得总生物碱156 g。总生物碱进行硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（100∶0→5∶1）梯度洗脱，薄层层析检测，分为A-E五个部分。A部分进行硅胶柱层析，石油醚-二氯甲烷-二乙胺（100∶1∶1→5∶1∶1）梯度洗脱，分为A1-A5五个部分。A1部分通过反复硅胶柱层析（分别以石油醚-二氯甲烷-二乙胺和二氯甲烷-甲醇为洗脱系统）得化合物1（188 mg）和2（76 mg）。B部分进行硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（100∶1→10∶1）梯度洗脱，分为B1-B3三个部分。B3部分通过反复硅胶柱层析（分别以石油醚-二氯甲烷-二乙胺和二氯甲烷-甲醇为洗脱系统）得化合物3（46 mg）。 3 结构鉴定
化合物1白色细针状晶体，易溶于氯仿，改良碘化铋钾显色剂显色呈橘红色。1H-NMR （CDCl3， 400MHz） δ： 5.36 （m， 1H， H-6）， 3.36 （s， 3H， OCH3）， 3.07 （tt， J = 11.3， 4.5 Hz， 1H， H-3）， 2.17 （s， 3H， NMe2）， 1.00 （s， 3H， H-19）， 0.88 （d， J = 6.4 Hz， 3H， H-21）， 0.68 （s， 3H， H-18）. 13C NMR （CDCl3， 100MHz） δ： 140.8 （C-5）， 121.6 （C-6）， 80.3 （C-3）， 61.1 （C-20）， 56.9 （C-14）， 55.6 （OMe）， 54.7 （C-17）， 50.1 （C-9）， 41.4 （C-13）， 39.9 （NMe2）， 39.5 （C-12）， 38.6 （C-4）， 37.2 （C-1）， 36.9 （C-10）， 31.9 （C-8）， 31.8 （C-7）， 28.0 （C-2）， 27.7 （C-16）， 24.1 （C-15）， 21.1 （C-11）， 19.4 （C-19）， 12.1 （C-18）， 9.8 （C-21）。以上数据与文献[20]报道的NMR数据基本一致，故鉴定化合物1为Pachyaximine （A）。
化合物2 无色细针状晶体，易溶于氯仿，改良碘化铋钾显色剂显色呈橘红色。H-NMR （CDCl3， 400MHz） δ：5.35 （m， 1H， H-6）， 3.61 （s， 1H，H-16）， 3.35 （s， 3H，OMe），3.06 （tt， J = 11.3， 4.5 Hz， 1H，H-3），2.89 （d， J= 6.4 Hz， 1H，H-20）， 2.28 （s， 6H，NMe2），1.01 （s， 3H，H-19）， 0.91 （s， 3H，H-18），1.17 （d，J =6.7 Hz， 3H， H-21）. 13C-NMR （CDCl3， 100MHz） δ：141.1（C-5）， 121.4（C-6）， 80.3（C-3）， 73.6（C-17）， 61.1（C-16）， 56.0（C-20）， 55.8（OMe）， 50.5（C-9）， 45.6（C-14）， 43.2（NMe2）， 42.1（C-13）， 38.8（C-4）， 37.2（C-10）， 37.2（C-1）， 32.9（C-12）， 31.7（C-7）， 30.4（C-8）， 28.1（C-2）， 27.4（C-15）， 20.8（C-11）， 19.5（C-19）， 15.8（C-18）， 13.6（C-21）。以上數据与文献[17]报道的NMR数据基本一致，故鉴定化合物2为（20S）-20-（N，N-dimethylamino）-16α，17α-epoxy-3β-methoxy-pregn-5-ene。
化合物3白色细针状晶体易溶于氯仿，改良碘化铋钾显色剂显色呈橘红色。H-NMR（CDCl3，400MHz）δ： 5.62 （d，J=8.9 Hz， 1H，NH），5.50（s，1H，H-2′），5.26（t，J=2.8Hz，1H，H-4），5.11（d，J=3.6Hz，1H，H-2），4.32（dt，J=8.4，4.0Hz，1H，H-3），2.46（t，J=8.6Hz，1H），2.10（s，3H，MeCO），2.08（s，3H，MeCO），1.12（s，3H，H-19），0.89（d，J=6.5Hz，3H，H-21），0.63（s，3H，H-18）. 13C-NMR （CDCl3，100MHz）δ：170.7（MeCO）， 170.5（MeCO）， 166.1（C-1′）， 152.2（C-3′）， 118.1（C-2′）， 74.2（C-4）， 72.0（C-2）， 61.4（C-20）， 56.4 （C-9）， 55.7（C-17）， 49.3（C-3）， 48.8（C-5）， 41.8（C-13）， 40.9（C-1）， 39.9（NMe2）， 39.6（C-12）， 34.9（C-8）， 34.8（C-10）， 31.8（C-7）， 27.7（C-16）， 27.3（C-6）， 25.2（C-15）， 24.1（C-5′）， 21.5（C-11）， 21.2（MeCO）， 20.7（MeCO）， 20.0（C-4′）， 15.4（C-19）， 12.4（C-18），10.1（C-21）。以上数据与文献[21]报道的NMR数据基本一致，故鉴定化合物3为（2α，3β，4β，20S）-2，4-bis（acetoxy）-20-（N，N-dimethylamino）-3-[（3-methylbut-2-enoyl）amino]-5α-pregnane。
4 讨论
野扇花属植物在贵州省资源丰富，民间使用广泛，国外学者从该属植物中分离出大量的孕甾烷生物碱，然而关于该属植物的化学成分研究，国内报道较少。本实验从黔产苗药三两银中分离鉴定了3个孕甾烷生物碱，分别为Pachyaximine （A） （1）、（20S）-20-（N，N-dimethylamino）-16α，17α-epoxy-3β- methoxy-pregn-5-ene （2）、（2α，3β，4β，20S）-2，4-bis（acetoxy）-20-（N，N-dimethylamino）-3-[（3-methylbut-2-enoyl）amino]-5α-pregnane （3），化合物结构见图1。3个化合物均为首次从该植物中分离得到。
苗族人民在长期与疾病斗争的过程中形成了独特的诊疗体系，在治疗外伤和一些地方性多发病方面往往有独到的效果。课题组在民间调研时发现野扇花属植物在苗族民间广泛应用于治疗胃肠溃疡、脑憨症等疾病。结合三两银在民间医药中的应用，本实验对其进行系统的化学成分和生物活性研究，为合理开发苗药三两银的药用价值提供理论基础。 参考文献
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