【摘 要】
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目的:建立一种检测氯霉素(chloramphenicol,CAP)和克伦特罗(clenbuterol,CL)兽药残留的新型高通量悬浮芯片技术.方法:合成2种兽药的牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)
【机 构】
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军事医学科学院卫生学环境医学研究所,军事医学科学院放射与辐射医学研究所
【基金项目】
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国家科技支撑计划;国家自然科学基金
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目的:建立一种检测氯霉素(chloramphenicol,CAP)和克伦特罗(clenbuterol,CL)兽药残留的新型高通量悬浮芯片技术.方法:合成2种兽药的牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)结合物,并进行紫外和质谱鉴定.将2种兽药的BSA蛋白结合物偶联于悬浮芯片的固相载体--聚苯乙烯荧光微球上,在液相反应体系中,2种小分子兽药抗原和微球上的结合物共同竞争液相中各自特异性的生物素化单抗,优化和筛选出微球上偶联BSA结合物和反应抗体的最适加入量.绘制2种兽药残留检测的标准曲线,进行特异性检测和盲样的测定.结果:2种小分子兽药可与BSA成功偶联,CAP和CL与BSA的偶联比分别为40∶ 1和31∶ 1.经过优化,2种结合物的最适加入量均为5 μg/100 μl羧基微球;最佳抗体加入量分别为5和1 ng/2 000个反应微球.检测的标准曲线方程和方程相应的决定系数分别为:YCAP＝-250.323+4103.517/[1+(X/30121.243)0.980],r2＝0.994 和YCL＝-263012.682+265751.765/[1+(X/6.063)0.115],r2＝0.989.2种兽药悬浮芯片的检测区间分别为40～6.25×105ng/L和50～7.81×105ng/L;最低检出限为:40 ng/L和50 ng/L.CAP 和CL最低检出限均低于国标.同时,悬浮芯片的特异度测试良好,与其他药物无明显交叉反应.悬浮芯片对盲样测定的检测浓度值与实际浓度偏差较小.扫描电镜对微球表面微观结构的观察也直观地确证了蛋白在微球上的成功偶联.结论:高通量悬浮芯片技术操作简单,灵敏快速,成本低廉,为多种兽药残留的快速检测提供了新方法,具有广阔的应用和发展前景.
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