人Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

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目的构建基因工程菌株,以获得重组人Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶(ALT2)蛋白.方法逆转录PCR法从人肌肉组织总RNA中扩增ALT2基因片段,插入原核表达载体pET-28a,构建成融合表达质粒pET28-ALT2,将其转化大肠杆菌BL21 DE3,IPTG诱导表达.SDS-PAGE、活力测定、活性染色及western blot鉴定表达产物.结果重组质粒pET28-ALT2测序和酶切结果与预期完全符合.IPTG诱导后,阳性菌体裂解物上清ALT2活性很高,PAGE出现一分子量58 000蛋白条带,可被抗ALT1抗血清
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