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【摘要】 目的 分析讨论梅毒抗体经ELISA法检测后出现假阳性的原因并探讨其解决方法。方法 选取梅毒患者1620例，将其分为老年组和中青年组，对其血清中的梅毒抗体采用ELISA法来进行检测，两组中检测结果为阳性的患者，再进一步使用TP-PA试剂来确诊。结果 检测出老年组假阳性率为3.4%，中青年组假阳性率为1.2%，两组之间统计学差异明显（P<0.05）。结论 年龄为导致ELISA法检测梅毒抗体呈假阳性的重要因素之一，临床检测中应予以重视。
【关键词】 梅毒抗体；假阳性；原因；ELISA法
文章编号：1004-7484（2013）-10-6057-01
导致人们感染梅毒病毒的是一种名为梅毒螺旋体的微生物，梅毒是种以性传播为主要方式，严重危害人体健康的常见性疾病，在世界各地范围内均有分布。最近几年，中国的梅毒患者增长显著。引起了各界人士的广泛关注。梅毒的传播方式主要通过性交和血液。诊断梅毒的方法有很多种，血清学检查就是其中之一。现阶段以酶联免疫吸附实验为主要的血清学检验方法，其主要特点为高度敏感性和高度特异性。由于ELISA法能够大批量检测，操作方便检且测费低，因此被广泛使用。但却出现一些个例，即无不洁性史者、临床特征表现正常者被检出为阳性[1]。为了防止出现不必要的诊断错误和医患纠纷，本文对假阳性原因的产生加以分析，现汇报如下：
1 资料和方法
1.1 对象 选取在2010年12月——2011年12月期间进入我院体检、住院及门诊病人1620例。其中中青年对照组为1110例，年龄分布在21岁至55岁之间，平均为37岁。老年组共有520例，年龄分布在60岁至85岁之间，平均年龄为72岁。
1.2 试剂 TP-ELISA试剂为研辉科技公司提供；TP-PA试剂为塞乐迪亚试剂。
1.3 仪器 FAME24/20全自动酶标仪，GENESISrsp120加样仪。
1.4 方法 分别对老年组和中青年组使用ELISA法进行检测，若检测出梅毒抗体呈阳性，则继续使用梅毒螺旋体诊断试剂（TP-PA）进一步诊断。
2 结 果
通过ELISA法检测老年组梅毒抗体假阳性率为3.4%，而中青年组梅毒抗体假阳性率为1.2%，所以可以明显看出老年组假阳性率较高，二组之间用t检验比较，在统计学上有显著的差异（P<0.05），见表1。
3 假阳性现象分析及其对策
3.1 生物学因素
3.1.1 个体因素 在年龄逐步增长的同时，机体各项生理机能也在慢慢退化，人体免疫系统出现异常，产生了能够影响检测结果的异常蛋白抗体，使检测呈现假阳性结果。而当患者自身患有免疫性疾病时，由于内在免疫环境的改变，使患者体内产生具有吸附作用的特殊成分，干扰检测效果，使显色反应呈假阳性[3]。
3.2 技术性因素
3.2.1 标本溶血 样本发生溶血时，细胞液中的大量活性酶及具有酶活性的物质以非特异性的方式与底物进行结合；具有类过氧化物酶活性的血红蛋白，其效应与HRP类似，具有吸附作用，能使底物中有色化合物含量上升，形成显色反应，本底OD值升高，产生假阳性结果。
3.2.2 标本处理 离心分离处理不完全。未完全析出纤维蛋白，导致洗板清洁程度不够，吸光度偏高，产生假阳性结果
3.2.3 标本污染 细菌使血液样本受到污染，由于细菌体内含有内源性HRP，会出现特异性干扰，导致假阳性结果。
3.2.4 标本保存 标本在冰柜中存放过久，血清中的IgG聚会形成多聚体，AFP形成二聚体，本底过深，造成假阳性结果。
3.2.5 操作不当 洗涤中如出现渗漏溢出等现象，会导致阴性孔被阳性标本的反应液污染，从而产生假阳性结果；洗涤不充分时，会致使酶试剂残留于板孔中最终导致出现假阳性结果。
3.3 仪器因素
3.3.1 检测仪的使用 ELISA试验过程中必须要使用到酶标仪，它是通过对反应孔进行垂直比色来分析结合物含量，当反应般底部被污染时，会导致吸光值的升高，最终产生假阳性的结果[4]。
3.3.2 拖带阳性 由于目前使用的全自动加样器针头为多次使用，加样针虽能够拆卸清洗，但清洗并不彻底。当遇到高滴度抗体标本时，由于未能充分洗净加样针，导致同一加样针拖带污染其后一孔甚至多孔，产生假阳性现象。
3.4 方法学因素
3.4.1 灰带区现象 梅毒ELISA检测为定性检测，在阳性与阴性二者之间有非常明显的分界，称为阳性判定值，往往将阳性判定值上下的一定区域范围称为灰带区。当测定结果值在阳性判定值上下时易出现假阳性的现象。需反复试验来确定结果。
3.4.2 空白对照 对于测定结果而言，当在使用单波长测定酶联免疫吸附结果时，空白对照的设置有着很大的影响。由于反应孔划痕的影响，能够使测定A值升高。不设空白对照的话，会影响判读结果导致假阳性的出现。
3.5 假阳性的对策 为了避免血液标本引起的假阳性，应做好采血环节的工作，要使用正确的采血方式，不宜过快抽血。当使用注射器时，应先拔下针头，使血液沿着管壁缓慢注入试管。在运送血液标本时，要防止剧烈振动。应当先在37摄氏度的水浴中将采集后的血液标本浸泡30分钟后，再离心10分钟。洗板时要注意充分洗涤，反应板的底部应当保持洁净。洗涤过程中繇谨防出现反应液溢出的现象[5]。
由于受检者的自身因素，仪器拖带，方法学因素而产生的假阳性，必须通过TPPA试验来进行排除。
确诊梅毒的重要方法之一就是血清学试验，在使用ELISA法检测时应仔细排除各种干扰因素，综合考虑患者自身实际情况及临床诊断结果，做出正确的诊断，检测结果为阳性时应当进一步结合TPPA试验来进行确诊，以避免误诊和假阳性结果的出现[6]。
综上所述，诊断梅毒的方法中，ELISA试验的价值是巨大的，但是也存在着假阳性现象。其中年龄是导致结果呈假阳性的重要因素之一。其他还有患者个体因素，技术因素，方法因素，仪器因素等。临床医师在遇到可能的阳性标本时，应当进行全面性的综合分析，结合患者自身实际情况，如有无性病史，抗梅毒治疗史等，同时也应重点注意患者年龄，是否存在梅毒体征等[2]。也可采取重新取样，结合其他如TRPR、PPA、TRUST等检测方法来进一步确诊，当检测结果仍为阳性时即可确诊。应当避免各种人为影响因素，避免由于产生假阳性结果而造成误诊，引起医疗纠纷。
参考文献
[1] 季德成，李小平，董春雷，等.ELISA法检测老年人梅毒抗体易产生假阳性分析[J].放射免疫学杂志，2009，18（3）：239-240.
[2] 邰平，王进.ELISA法检测梅毒抗体假阳性原因分析与对策[J].江苏预防医学，2010，21（2）：56-57.
[3] 赵向东，罗红林，连云.ELISA法检测梅毒抗体的应用[J].右江民族医学院学报，2009：546-547.
[4] 于丽君，甘新宇，黄菲.ELISA检测梅毒抗体假阳性产生的原因分析[J].西南国防医药，2009，18（5）：773-774.
[5] 刘勇，肖玲，刘敏.ELISA法筛查临床样本中梅毒螺旋体抗体假阳性结果分析[M].医学信息，2012：151-153.
[6] 汪德宇.酶联免疫吸附法出现假阳性的原因分析和解决方法[J].中国当代医药，2009，16（19）：137-138.
【关键词】 梅毒抗体；假阳性；原因；ELISA法
文章编号：1004-7484（2013）-10-6057-01
导致人们感染梅毒病毒的是一种名为梅毒螺旋体的微生物，梅毒是种以性传播为主要方式，严重危害人体健康的常见性疾病，在世界各地范围内均有分布。最近几年，中国的梅毒患者增长显著。引起了各界人士的广泛关注。梅毒的传播方式主要通过性交和血液。诊断梅毒的方法有很多种，血清学检查就是其中之一。现阶段以酶联免疫吸附实验为主要的血清学检验方法，其主要特点为高度敏感性和高度特异性。由于ELISA法能够大批量检测，操作方便检且测费低，因此被广泛使用。但却出现一些个例，即无不洁性史者、临床特征表现正常者被检出为阳性[1]。为了防止出现不必要的诊断错误和医患纠纷，本文对假阳性原因的产生加以分析，现汇报如下：
1 资料和方法
1.1 对象 选取在2010年12月——2011年12月期间进入我院体检、住院及门诊病人1620例。其中中青年对照组为1110例，年龄分布在21岁至55岁之间，平均为37岁。老年组共有520例，年龄分布在60岁至85岁之间，平均年龄为72岁。
1.2 试剂 TP-ELISA试剂为研辉科技公司提供；TP-PA试剂为塞乐迪亚试剂。
1.3 仪器 FAME24/20全自动酶标仪，GENESISrsp120加样仪。
1.4 方法 分别对老年组和中青年组使用ELISA法进行检测，若检测出梅毒抗体呈阳性，则继续使用梅毒螺旋体诊断试剂（TP-PA）进一步诊断。
2 结 果
通过ELISA法检测老年组梅毒抗体假阳性率为3.4%，而中青年组梅毒抗体假阳性率为1.2%，所以可以明显看出老年组假阳性率较高，二组之间用t检验比较，在统计学上有显著的差异（P<0.05），见表1。
3 假阳性现象分析及其对策
3.1 生物学因素
3.1.1 个体因素 在年龄逐步增长的同时，机体各项生理机能也在慢慢退化，人体免疫系统出现异常，产生了能够影响检测结果的异常蛋白抗体，使检测呈现假阳性结果。而当患者自身患有免疫性疾病时，由于内在免疫环境的改变，使患者体内产生具有吸附作用的特殊成分，干扰检测效果，使显色反应呈假阳性[3]。
3.2 技术性因素
3.2.1 标本溶血 样本发生溶血时，细胞液中的大量活性酶及具有酶活性的物质以非特异性的方式与底物进行结合；具有类过氧化物酶活性的血红蛋白，其效应与HRP类似，具有吸附作用，能使底物中有色化合物含量上升，形成显色反应，本底OD值升高，产生假阳性结果。
3.2.2 标本处理 离心分离处理不完全。未完全析出纤维蛋白，导致洗板清洁程度不够，吸光度偏高，产生假阳性结果
3.2.3 标本污染 细菌使血液样本受到污染，由于细菌体内含有内源性HRP，会出现特异性干扰，导致假阳性结果。
3.2.4 标本保存 标本在冰柜中存放过久，血清中的IgG聚会形成多聚体，AFP形成二聚体，本底过深，造成假阳性结果。
3.2.5 操作不当 洗涤中如出现渗漏溢出等现象，会导致阴性孔被阳性标本的反应液污染，从而产生假阳性结果；洗涤不充分时，会致使酶试剂残留于板孔中最终导致出现假阳性结果。
3.3 仪器因素
3.3.1 检测仪的使用 ELISA试验过程中必须要使用到酶标仪，它是通过对反应孔进行垂直比色来分析结合物含量，当反应般底部被污染时，会导致吸光值的升高，最终产生假阳性的结果[4]。
3.3.2 拖带阳性 由于目前使用的全自动加样器针头为多次使用，加样针虽能够拆卸清洗，但清洗并不彻底。当遇到高滴度抗体标本时，由于未能充分洗净加样针，导致同一加样针拖带污染其后一孔甚至多孔，产生假阳性现象。
3.4 方法学因素
3.4.1 灰带区现象 梅毒ELISA检测为定性检测，在阳性与阴性二者之间有非常明显的分界，称为阳性判定值，往往将阳性判定值上下的一定区域范围称为灰带区。当测定结果值在阳性判定值上下时易出现假阳性的现象。需反复试验来确定结果。
3.4.2 空白对照 对于测定结果而言，当在使用单波长测定酶联免疫吸附结果时，空白对照的设置有着很大的影响。由于反应孔划痕的影响，能够使测定A值升高。不设空白对照的话，会影响判读结果导致假阳性的出现。
3.5 假阳性的对策 为了避免血液标本引起的假阳性，应做好采血环节的工作，要使用正确的采血方式，不宜过快抽血。当使用注射器时，应先拔下针头，使血液沿着管壁缓慢注入试管。在运送血液标本时，要防止剧烈振动。应当先在37摄氏度的水浴中将采集后的血液标本浸泡30分钟后，再离心10分钟。洗板时要注意充分洗涤，反应板的底部应当保持洁净。洗涤过程中繇谨防出现反应液溢出的现象[5]。
由于受检者的自身因素，仪器拖带，方法学因素而产生的假阳性，必须通过TPPA试验来进行排除。
确诊梅毒的重要方法之一就是血清学试验，在使用ELISA法检测时应仔细排除各种干扰因素，综合考虑患者自身实际情况及临床诊断结果，做出正确的诊断，检测结果为阳性时应当进一步结合TPPA试验来进行确诊，以避免误诊和假阳性结果的出现[6]。
综上所述，诊断梅毒的方法中，ELISA试验的价值是巨大的，但是也存在着假阳性现象。其中年龄是导致结果呈假阳性的重要因素之一。其他还有患者个体因素，技术因素，方法因素，仪器因素等。临床医师在遇到可能的阳性标本时，应当进行全面性的综合分析，结合患者自身实际情况，如有无性病史，抗梅毒治疗史等，同时也应重点注意患者年龄，是否存在梅毒体征等[2]。也可采取重新取样，结合其他如TRPR、PPA、TRUST等检测方法来进一步确诊，当检测结果仍为阳性时即可确诊。应当避免各种人为影响因素，避免由于产生假阳性结果而造成误诊，引起医疗纠纷。
参考文献
[1] 季德成，李小平，董春雷，等.ELISA法检测老年人梅毒抗体易产生假阳性分析[J].放射免疫学杂志，2009，18（3）：239-240.
[2] 邰平，王进.ELISA法检测梅毒抗体假阳性原因分析与对策[J].江苏预防医学，2010，21（2）：56-57.
[3] 赵向东，罗红林，连云.ELISA法检测梅毒抗体的应用[J].右江民族医学院学报，2009：546-547.
[4] 于丽君，甘新宇，黄菲.ELISA检测梅毒抗体假阳性产生的原因分析[J].西南国防医药，2009，18（5）：773-774.
[5] 刘勇，肖玲，刘敏.ELISA法筛查临床样本中梅毒螺旋体抗体假阳性结果分析[M].医学信息，2012：151-153.
[6] 汪德宇.酶联免疫吸附法出现假阳性的原因分析和解决方法[J].中国当代医药，2009，16（19）：137-138.