【摘 要】
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活性维生素D3具有广泛生理活性及药用价值,利用分子操作技术,在大肠杆菌细胞中重组表达VD3羟化过程的关键酶体系,是实现活性维生素D3生物法合成的有效手段。构建了来源于自养
【机 构】
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浙江省生物有机合成技术研究重点实验室浙江工业大学生物工程学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31400978);浙江省教育厅科研项目(Y201329109)资助项目
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活性维生素D3具有广泛生理活性及药用价值,利用分子操作技术,在大肠杆菌细胞中重组表达VD3羟化过程的关键酶体系,是实现活性维生素D3生物法合成的有效手段。构建了来源于自养无枝酸菌（Pseudonocardia autotrophica）VD3羟化酶（Vdh,EC 1.14.13.159）及来源于不动杆菌（Acinetobacter sp.OC4）的铁氧还蛋白Fdx及铁氧还蛋白还原酶FdR的重组表达载体p ET28b-Vdh、p ET28b-FdR-Fdx,以大肠杆菌为宿主细胞,体外诱导表达并通过镍柱纯化三种蛋白质,通过CO差光谱法评价羟化酶Vdh体外活性,并利用2,6-二氯靛酚钠（DCIP）和细胞色素c作为电子受体评价电子传递链FdR-Fdx对NADH和NADPH的氧化活性及与羟化酶Vdh的偶联作用,最后利用Vdh及其电子传递链催化维生素D3的选择性羟化合成25（OH）VD3。
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