目的:建立中药制剂四季三黄丸HPLC指纹图谱,确定10批四季三黄丸指纹图谱共有峰与其体外抗氧化活性作用贡献大小。方法:利用HPLC研究四季三黄丸指纹图谱,利用DPPH自由基清除实验研究其体外抗氧化作用,利用灰关联度分析法研究其谱效关系。结果:将10批经过积分处理的四季三黄丸样品的色谱图导入国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版软件,确定了33个共有峰,批次间相似度均在0.9以上,通过与对照品的保留时间和在线紫外光谱进行比较,对其中9个特征峰进行了定性;四季三黄丸体外抗氧化作用是多化学成分共同作用的结果,通过实验确定了各特征峰对DPPH自由基清除作用贡献大小顺序,其中11号峰和31号峰贡献最大,4号峰和13号峰贡献最小。结论:本实验所构建的四季三黄丸HPLC指纹图谱方法简单,重复性好,可为四季三黄丸的鉴别和质量评价提供参考,四季三黄丸HPLC指纹图谱与其体外抗氧化活性之间有一定的相关性。