【摘 要】
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目的 观察野生型C3H/HeN小鼠和Toll样受体4(TLR4)基因缺陷型C3H/HeJ小鼠腹腔巨噬细胞在脂多糖(LPS)刺激下激活状态的差异,从体外途径探讨TLR4传导信号在前葡萄膜炎发病中的可
【机 构】
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首都医科大学附属北京朝阳医院眼科,北京市海淀妇幼保健院眼科
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目的 观察野生型C3H/HeN小鼠和Toll样受体4(TLR4)基因缺陷型C3H/HeJ小鼠腹腔巨噬细胞在脂多糖(LPS)刺激下激活状态的差异,从体外途径探讨TLR4传导信号在前葡萄膜炎发病中的可能作用机制.设计实验研究.研究对象健康成年C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠.方法 常规提取两种小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,按处理因素不同随机分六组:C3H/HeN小鼠LPS组、正常对照组、抗TLR4附单克隆抗体加LPS组、抗TLR4单克隆抗体组;C3H/HeJ小鼠LPS组、正常对照组.各组在不司处理后1h、3h、6h、12h、24h五个时间点通过免疫荧光组织化学染色进行观察.主要指标TLR4传导途径中关键分子TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-кB(NF-кB)免疫荧光强度及表达位置差异.结果 所有组TLR4均表达于细胞膜,MyD88表达于细胞质和细胞核.C3H/HeN小鼠LPS组和C3H/HeJ小鼠LPS组TLR4荧光强度比较,差异有统计学意义;余各组TLR4荧光强度两两比较,差异无统计学意义.C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞LPS组随LPS刺激时间的延长,各观察时间点MyD88荧光强度逐渐减弱,总体差异有统计学意义;余各组各时间点MyD88荧光强度无明显变化.C3H/HeN小鼠正常对照组、抗TLR4单克隆抗体组,C3H/HeJ小鼠正常对照组腹腔巨噬细胞各时间点NF-кB均表达于胞质,C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞LPS刺激1h后NF-кB表达于胞核,3h依旧表达于胞核,此后无法检测到NF-кB的表达.C3H/HeN小鼠抗TLR4单克隆抗体加LPS组、C3H/HeJ小鼠LPS组巨噬细胞经LPS刺激1h后NF-кB转移至胞膜,直至24h一直表达于胞膜.结论 腹腔巨噬细胞TLR4传导途径中核因子的转位可能与前葡萄膜炎的发病有关,特异性阻断该途径或许为前葡萄膜炎的治疗提供新思路.
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