【摘 要】
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目的 克隆Kit6.2基因,构建真核表达载体pcDNA3.0/Kir6.2,将重组质粒转染HEK293细胞获得高表达Kir6.2基因的细胞克隆.方法 从SD大鼠脑组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得Kit6
【机 构】
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山东大学附属省立医院神经内科,济南,250021
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目的 克隆Kit6.2基因,构建真核表达载体pcDNA3.0/Kir6.2,将重组质粒转染HEK293细胞获得高表达Kir6.2基因的细胞克隆.方法 从SD大鼠脑组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得Kit6.2基因的全长cDNA,插入TI-simple克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pcDNA3.0,利用脂质体将重组质粒转染HEK293细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,采用RT-PCR和Western blot方法,鉴定Kir6.2基因在HEK293细胞中的过表达.结果 经PCR和DNA序列测定证实,目的 基因已插入重组质粒,RT-PCR和West-em blot证明,经G418筛选得到的转基因HEK293细胞克隆中存在Kir6.2基因的表达.结论 成功构建Kir6.2基因的真核表达载体,获得稳定表达Kil6.2基因的HEK293 细胞克隆.
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