【摘 要】
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为了建立沙门氏菌的快速、可视化检测方法,根据核酸横流生物传感器(lateral flow nucleic acid biosensor,LFNAB)的检测原理,对沙门氏菌核酸扩增产物进行改良。以沙门氏菌DNA
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院; 黑龙江八一农垦大学动物科技学院; 长春军事医学科学院军事兽医研究所; 杜尔伯特蒙古族自治县畜牧局;
【基金项目】
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农垦总局课题“提高母猪年生产力关键技术集成与示范”(HNK135-04-06-02)
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为了建立沙门氏菌的快速、可视化检测方法,根据核酸横流生物传感器(lateral flow nucleic acid biosensor,LFNAB)的检测原理,对沙门氏菌核酸扩增产物进行改良。以沙门氏菌DNA为模板,通过PCR技术和DNA酶的介导,将生物素-三磷酸碱基脱氧核苷酸(Biotin-dNTP)引入DNA链中,使高拷贝的DNA双链携带一定含量的生物素分子。在DNA链上,由于上游引物修饰的异硫氰酸荧光素抗原(FAM)和dNTP上携带的生物素分子(Biotin),导致新产生的PCR产物可采用LFNAB进行检测。实验证明,Biotin-dUTP最佳的使用量是脱氧胞嘧啶核苷三磷酸(dTTP)和Biotin-dUTP混合物的总量的5%,且LFNAB的样品检验效果清晰直观、肉眼可见,能够检测出101 CFU·mL-1浓度的沙门氏菌。
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