【摘 要】
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通过PCR法,将来源于蛇毒蛋白质eristostatin中的一段含有RGD(Arg-Gly-Asp)序列的十三肽(SRVARGDWNDDYS)的基因,以一个无胰岛素活性但保留天然免疫原性的胰岛素原突变体(PJG40
【机 构】
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北京大学生命科学学院,蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室,北京,100871中国医学科学院协和医科大学药用植物研究所,北京,100093;
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通过PCR法,将来源于蛇毒蛋白质eristostatin中的一段含有RGD(Arg-Gly-Asp)序列的十三肽(SRVARGDWNDDYS)的基因,以一个无胰岛素活性但保留天然免疫原性的胰岛素原突变体(PJG401)基因为模板,置换其B28和A1位之间的连接肽基因,构建成了能展示RGD功能序列的人源化分子(RGD226)的基因.通过该基因在大肠杆菌中的表达、产物分离纯化,得到高纯度RGD226.该RGD肽对由ADP诱导的体外人血小板聚集的半抑制浓度IC50为22.3 μmol/L.其胰岛素免疫活性是PJG401的15.1%,提示其在一定程度上保留了胰岛素原的免疫原性.其受体结合活性不到PJG401的0.1%,说明其胰岛素的生物活性基本丧失.动物实验证实,RGD226在延长小鼠出血时间上具有较明显的作用.
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