【摘 要】
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猪囊尾蚴CE18重组蛋白(rCE18)在大肠杆菌表达后形成包涵体,为了获得高纯度的、有生物活性的rCE18,本研究采用超声破碎菌体,0.2%、2%DOC(脱氧胆酸钠)逐次洗涤包涵体及0.9%SKL(
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室;
【基金项目】
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甘肃省科技型中小型企业技术创新基金(No.2GS055-A43-057)资助~~
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猪囊尾蚴CE18重组蛋白(rCE18)在大肠杆菌表达后形成包涵体,为了获得高纯度的、有生物活性的rCE18,本研究采用超声破碎菌体,0.2%、2%DOC(脱氧胆酸钠)逐次洗涤包涵体及0.9%SKL(十二烷基肌氨酸钠)溶解包涵体后,利用透析与凝胶过滤层析技术相结合对rCE18进行复性和纯化。同时,采用GST-FF亲和柱层析及SDS-PAGE胶回收蛋白两种方法纯化rCE18,比较三者的纯化效果。并通过间接ELISA检测复性蛋白的生物学活性。结果表明:经透析与凝胶层析复性纯化后的rCE18蛋白的纯度可达到60%以上,活性回收率为41.3%,间接ELISA证实,复性后的rCE18蛋白能特异性识别猪囊虫阳性血清,检测敏感性高达97.2%,与全囊虫抗原检测的符合率为100%。本试验初步建立了猪囊尾蚴rCE18包涵体纯化及复性的有效方法,为猪囊尾蚴rCE18蛋白的诊断应用奠定了基础。
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