【摘 要】
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根据我们实验室发现的鸭疫里默氏杆菌(RA)荚膜多糖蛋白基因序列(DQl51838),设计和合成荧光定量PCR引物和探针,建立了检测RA的实时荧光定量PCR方法.该法的表达式Y=-3.416X+39.
【机 构】
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四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心,动物疫病与人类健康四川省重点实验室
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根据我们实验室发现的鸭疫里默氏杆菌(RA)荚膜多糖蛋白基因序列(DQl51838),设计和合成荧光定量PCR引物和探针,建立了检测RA的实时荧光定量PCR方法.该法的表达式Y=-3.416X+39.492,相关系数1.000,PCR循环效率96.2%,DNA拷贝数在100～108范围内检测曲线有良好的线性关系.该法的最适Mg2+、引物和探针浓度分别为4～5mmol/L、0.16～O.2 μmol/L和0.16/μmol/L,最低能够检测到RA的DNA模板为2.0 copies/μL.1、10半数致死量的RA人工皮下注射感染7日龄樱桃谷鸭后2h即可在心、肝、肺、胸腺、食管中检测到RA核酸;感染后8h即可在心、肝、脾、肺、肾、脑、胰、食管、气管、胸腺、法氏囊、十二指肠、直肠、血液和咽喉拭子检测到RA核酸,36～120 h是RA在感染雏鸭除了咽喉、食管和气管各个组织器官繁殖数量最高峰期,其后逐渐下降.RA人工感染致死雏鸭的心、肝、脑RA分离和FQPCR检测符合率为100%.对I临床送检具有典型鸭疫里默氏杆菌病临床症状和病理变化的死亡雏鸭的肝脏、心血和脑组织的FQ-PCR检测的阳性率均为100%,而RA分离的阳性率分别只有74.3%(26/35)、82.9%(29/35)和91.4%(32/35).FQ-PCR可用于鸭疫里默氏杆菌感染的快速诊断、流行病学调查和鸭产品的检疫等.
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