【摘 要】
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目的 研究微小RNA-876-3p(miR-876-3p)通过调控肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)对胃癌细胞增殖和顺铂(DDP)耐药性的影响.方法 体外培养胃癌细胞MKN28,用低浓度梯度递增方法诱导M
【机 构】
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开滦总医院 普通外科,河北 开滦063000
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目的 研究微小RNA-876-3p(miR-876-3p)通过调控肽基脯氨酰顺反异构酶A(PPIA)对胃癌细胞增殖和顺铂(DDP)耐药性的影响.方法 体外培养胃癌细胞MKN28,用低浓度梯度递增方法诱导MKN28细胞形成顺铂耐药性,以构建顺铂耐药细胞株(MKN28/DDP).MKN28和MKN28/DDP细胞各包含4个实验组:阴性对照组、第1转染组(转染si-PPIA)、第2转染组(转染miR-876-3p mimics)和第3转染组(转染si-PPIA+miR-876-3p inhibitor).用顺铂1μg·mL-1处理各组MKN28细胞,用顺铂5μg·mL-1处理各组MKN28/DDP细胞,培养24 h.以实时荧光定量-PCR法检测各组细胞中miR-876-3p表达水平,蛋白质印迹法检测各组细胞中PPIA蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒法检测各组细胞增殖活力,流式细胞术检测各组细胞细胞凋亡水平.结果 miR-876-3p在正常胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞MKN28和MKN28/DDP中的相对表达量分别为1.01±0.21,0.41±0.15和0.32±0.11,MKN28与GES-1比较,差异有统计学意义(P<0.01);MKN28/DDP与MKN28比较,差异有统计学意义(P<0.05).在表达miR-876-3p实验中,1μg·mL-1顺铂处理MKN28,阴性对照组和第3转染组的细胞活力分别为(1.00±0.04)％,(0.65±0.03)％;这2组的细胞凋亡率(41.87±1.65)％,(68.98±4.12)％.5μg·mL-1顺铂处理MKN28/DDP,阴性对照组和第3转染组的细胞活力分别为(1.01±0.02)％,(0.72±0.05)％;这2组的细胞凋亡率分别为(34.66±0.94)％,(56.71±3.03)％,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05).miR-876-3p可靶向结合PPIA.以1μg·mL-1顺铂处理MKN28细胞,阴性对照组、第1转染组和第3转染组的细胞活性分别为(1.01±0.03)％,(0.58±0.04)％和(0.97±0.02)％;这3组的细胞凋亡率分别为(39.96±2.01)％,(71.12±2.98)％和(45.14±2.47)％.以5μg·mL-1顺铂处理MKN28/DDP细胞,这3组的细胞活性分别为(1.01±0.04)％,(0.63±0.06)％ 和(0.94±0.05)％;这3组的细胞凋亡率分别为(31.95±1.31)％,(62.88±5.63)％和(36.84±2.11)％.上述指标:第1转染组与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);第3转染组与第1转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 过表达miR-876-3p可明显上调胃癌细胞对顺铂的敏感性,其机制是通过靶向下调PPIA的表达从而降低胃癌细胞增殖、增加其凋亡.
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