【摘 要】
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为降低黄曲霉毒素抗体制备成本,在已有的能分泌抗黄曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞系8F6的基础上,成功克隆得到了该单克隆抗体的重链(VH)和轻链可变区(VL)基因片段。通过重
【机 构】
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中国农业科学院油料作物研究所,农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室,农业部生物毒素检测重点实验室,农业部油料产品质量安全风险评估实验室（武汉）,农业部油料及制品质量监督检验测试中心
【基金项目】
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农业部948项目(2010-G1,2011-G5);国家自然科学基金(31171702,31101299);国家农业行业科技专项(201203094,201203037);国家科技支撑计划(2012BAB19B09,2012BAK08B03);中国农业科学院油料作物研究所所长基金项目(1610172010003)
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为降低黄曲霉毒素抗体制备成本,在已有的能分泌抗黄曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞系8F6的基础上,成功克隆得到了该单克隆抗体的重链(VH)和轻链可变区(VL)基因片段。通过重叠延伸PCR的方法将轻、重链可变区基因连接,并引入连接肽(Linker)编码序列,构建VH-Linker-VL结构的单链抗体(ScFv)基因,并将该基因克隆到噬菌体表达载体pCANTAB 5E上,使单链抗体以噬菌体展示形式在大肠杆菌TG1中表达。间接竞争ELISA方法检测到该ScFv对黄曲霉毒素B1的抑制率(IC50)值为0.57ng/mL,表明该单链抗体与亲本鼠单抗有相同的抗原结合特异性,且具有很高灵敏度。
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