【摘 要】
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目的 肝激酶基因B1(The liver kinase B1,LKB1)对子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞顺铂(Cisplatin,DDP)化疗敏感性的影响及作用机制.方法 qRT-PCR检测LKB1在DDP耐药EC
【机 构】
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广州市番禺中心医院妇科,广东广州510000
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目的 肝激酶基因B1(The liver kinase B1,LKB1)对子宫内膜癌(endometrial cancer,EC)细胞顺铂(Cisplatin,DDP)化疗敏感性的影响及作用机制.方法 qRT-PCR检测LKB1在DDP耐药EC细胞株Ishikawa/DDP及子EC细胞株Ishikawa中的表达情况.过表达质粒转染Ishikawa/DDP细胞,分为oe-NC组和oe-LKB1组,MTS检测各组细胞对DDP的敏感性;Hoechst 33342凋亡染色检测DDP处理各组细胞后细胞发生凋亡变化;流式细胞仪检测DDP处理各组细胞后细胞凋亡率变化;LKB1过表达重组慢病毒及其阴性对照空载以MOI=(病毒滴度×病毒体积)/细胞数目为20分别感染Ishikawa/DDP细胞,经1.0μg/mL G418(遗传霉素)筛选,成功构建稳定过表达LKB1(oe-LKB1)或对照(oe-NC)的Ishikawa/DDP细胞,注射到BALB/c裸鼠中构建裸鼠移植瘤模型,每天给予DDP 3mg/kg灌胃,观察各组肿瘤体积变化;Western-blot法检测DDP处理各组细胞后细胞中p-AMPK、p-mTOR和Bcl-2蛋白的表达.结果 qRT-PCR结果 LKB1 mRNA在DDP耐药EC细胞株Ishikawa/DDP中的表达为0.32 ± 0.06,显著低于EC细胞株Ishikawa中的表达1.00 ±0.10;MTS检测结果 显示过表达LKB1后DDP作用于Ishikawa/DDP的IC50值降低,对DDP的敏感性增加;Hoechst 33342凋亡染色结果 显示过表达LKB1后DDP处理的细胞Hoechst 33342染色阳性细胞增多;流式细胞仪结果 显示过表达LKB1后DDP处理的细胞凋亡率增加;裸鼠移植瘤模型结果 显示过表达LKB1后DDP灌胃的裸鼠肿瘤体积减小;Western-blot检测发现过表达LKB1后DDP处理的细胞中p-AMPK表达增多、p-mTOR和Bcl-2蛋白表达降低(P均＜0.05).结论 LKB1基因可能通过抑制AMPK/mTOR信号通路作用于Bcl-2凋亡蛋白,增加EC对DDP的化疗敏感性.
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