【摘 要】
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细菌脲酶能分解尿素为氨,在瘤胃尿素氮代谢中发挥重要作用。为了表达纯化并研究蛋白脲酶复合物UreABC,通过PCR扩增脲酶基因簇的结构基因ureA、ureB、ureC,将ureB构建在含有N端His标签的pet28a+载体,ureA、ureC基因共同构建在含有N端His标签的表达载体pETDuet-1,经酶切及测序鉴定得到正确的阳性克隆后,将两个质粒共同转化到大肠埃希菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导表达UreABC融合蛋白。采用SDS-PAGE凝胶电泳对蛋白表达进行鉴定,再通过蛋白纯化仪的镍柱、脱盐柱
【机 构】
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安徽农业大学动物科技学院,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室,太原市畜牧发展中心
【基金项目】
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中国农业科学院农业科技创新工程重大产出科研选题项目(CAAS-ZDXT2019004),国家重点研发计划项目(2018YFD0502000),中国农业科学院科技创新工程项目(ASTIP-IAS12),现代农业产业技术体系专项资金资助项目(CARS-37)。
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细菌脲酶能分解尿素为氨,在瘤胃尿素氮代谢中发挥重要作用。为了表达纯化并研究蛋白脲酶复合物UreABC,通过PCR扩增脲酶基因簇的结构基因ureA、ureB、ureC,将ureB构建在含有N端His标签的pet28a+载体,ureA、ureC基因共同构建在含有N端His标签的表达载体pETDuet-1,经酶切及测序鉴定得到正确的阳性克隆后,将两个质粒共同转化到大肠埃希菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导表达UreABC融合蛋白。采用SDS-PAGE凝胶电泳对蛋白表达进行鉴定,再通过蛋白纯化仪的镍柱、脱盐柱
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