【摘 要】
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目的 制备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)抗原的卵黄抗体IgY,建立检测MRSA的酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)方法 . 方法 用大肠埃希菌原核表达并纯
【机 构】
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潍坊医学院医学检验学系,山东潍坊,261053
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目的 制备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)抗原的卵黄抗体IgY,建立检测MRSA的酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)方法 . 方法 用大肠埃希菌原核表达并纯化PBP2a,采用胸部肌肉多点注射方式免疫产蛋母鸡,水稀释法粗提IgY,BCA法测定蛋白浓度,Western blot分析其特异性;以IgY抗体为捕获分子,以生物素标记的PBP2a特异性适配体为检测分子,建立检测MRSA的ELONA方法;对IgY包被量、生物素标记适配体用量及HRP标记链霉亲和素稀释度进行优化,测定该方法的灵敏度、特异性和重复性. 结果 成功表达和纯化PBP2a蛋白,Western blot显示IgY抗体能特异识别PBP2a蛋白.建立了检测MRSA的ELONA方法,其最佳包被用IgY稀释度为1∶1 600,生物素标记适配体用量为400 nmol/L,HRP标记链霉亲和素稀释度为1∶2 000.优化的ELO-NA对MRSA的检测限为2.87×102 CFU/ml;重复性试验的变异系数为4.7％.用该方法检测34株临床分离的金黄色葡萄球菌,与梅里埃VITEK2 Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统分析结果 一致性为100％. 结论 制备的抗MRSA PBP2a卵黄抗体具有较高特异性,基于该抗体建立的ELONA方法灵敏、特异、重复性好,可用于MRSA PBP2a的检测.
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