【摘要】目的：探讨湖南地区克氏原螯虾体表及体内金黄色葡萄球菌细菌数量的具体分布，为控制小龙虾的金葡菌及正确健康烹饪，卫生食用小龙虾提供参考。方法：通过从湖南省不同地区的20个市场共买来60只小龙虾，在无菌操作下采集克氏原螯虾体内外的样品并对金黄色葡萄球菌进行分离培养与生化鉴定，并采用B-P平板法对分离的菌株进行测定，以及体内外对比分析。结果：湖南不同地区各市场的可是原螯虾体内外均有葡萄球菌的污染，且检出率约为23.5%（P<0.05）。结论：湖南地区克氏原螯虾金黄色葡萄葡萄球菌细菌数体表大于体内。
　　【关键词】湖南地区，克氏原螯虾，金黄色葡萄球菌
　　创新性课题编号长医教[2014]10号-68
　　克氏原鳌虾，俗称小龙虾，也可以叫做红鳌虾或者淡水小龙虾，原产于美国，是美国淡水虾类养殖的重要品种。
　　金黄色葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水以及人和动物的体表粘膜等处均有可能存在。
　　本文以湖南各地区小龙虾为研究对象，通过对金黄色葡萄球菌的鉴定及数目的检测，确定其致病，指导人们健康营养食用小龙虾。
　　一、材料与方法
　　1.实验材料样品来自湖南省不同地区的20个市场共60只克氏原螯虾；Baird-Parker平板（北京奥博星生物技术有限公司）；BHI培养基（杭州百思生物技术有限公司）；兔血浆（北京奥博星生物技术有限公司）
　　2.实验方法
　　（一）提取样品：在无菌将来自于湖南省不同地区的20个市场共60只克氏原螯虾体表的壳和体内内脏分开提取并捣碎。
　　（二）制作BP平板
　　（三）金黄色葡萄球菌的分离及增菌培养
　　（）无菌称取体内外组织样品各25g，分别放入装有225ml生理盐水中均质，于8000r/min均质2min，制成10：1稀释液。
　　（1）分别无菌吸取上述10：1的稀释液各1ml，注入装有9ml生理盐水的成100：1的稀释液。
　　（2）重复上述步骤3次，直至制成100000：1的稀释液，并做好相应标记。
　　（3）将上述步骤摇床培养的每试管稀释液，分别吸取0.3ml、0.3ml、0.4ml涂布于BP平板，36±1℃培养45-48h。
　　（4）挑取BP平板上的可疑菌落1个或以上，分别接种到BHI和营养琼脂小斜面，标记好，36±1℃摇床培养18-24h。
　　二、结果
　　1.金黄色葡萄球菌的分离
　　从湖南不同地区20个市场采集的体内外样品不同浓度在B-P平板上分离生长情况不同（见表一），但菌株均为呈圆形、光滑突起、湿润、直径为1-2mm、颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。（体内见图一，体外见图二）


　　2.金黄色葡萄球菌的生化鉴定
　　（一）革兰染色
　　从BP平板上挑取疑似菌落进行染色在镜下均为葡萄串状结构。
　　（二）触媒实验
　　从BP平板上挑取疑似菌落进行实验均为阳性。
　　（三）凝固酶实验
　　阳性
　　3.金黄色葡萄球菌的药敏实验


　　4.体内外金黄色葡萄球菌的计数
　　体内的金黄色葡萄球菌平板计数：220 CFU/ml
　　体外的金黄色葡萄球菌平板计数：15000 CFU/ml
　　三、讨论
　　金黄色葡萄球菌是一种主要的食源性致病菌之一，国内学者们对食品中金黄色葡萄球菌污染状况进行研究，其结果表明食品种类不同金葡菌的污染情况也不同，牛奶和速冻食品中的金葡菌污染情况已研究的很透彻，而本研究工作从长沙美食小龙虾为思考点，从而开展对湖南地区克氏原鳌虾体内外金葡菌的测定及其对比分析，得到小龙虾体内外具体的金葡菌的细菌计数，从体内外不同金葡菌的多少思考如何更好的在食用小龙虾前进行清洗、烹饪及食用，由于近年来食品安全隐患成为热点，并且本研究结果对小龙虾食品产业提供一定意义上的参考指导，并指导人们更健康营养食用小龙虾。
　　【参考文献】
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　　[2]索于娟，于宏伟，凌巍等.食品中金黄色葡萄球菌污染状况研究[J].中国食品学报，2008：89-93
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　　通讯作者：张琼