[目的]碱性蛋白酶和复合蛋白酶为水解羊骨粉制备胶原多肽效果最好的两种单酶,为进一步提高酶解效果。[方法]以羊骨粉为原料,进行双酶水解,比较同步水解与顺序水解的效果,确定最优水解工艺。[结果]同步水解AB2组合的水解效果最优,各水解评价指标均显著高于单酶水解和顺序水解(P<0.05),与顺序水解相比不显著(P>0.05),但优于顺序水解且大大节省了时间,其水解工艺为:底物浓度9%,碱性蛋白酶和复合蛋白酶的加酶量分别为5.00%和4.25%,起始pH 8.5,50℃水解5h时,水解度达29.79%,氨基酸态氮28.13%,多肽生成量110.43mg·g-1,短肽得率73.88%。[结论]双酶同步水解羊骨粉提高酶解效果的同时,也为充分水解羊骨制备胶原多肽提供了试验支持。