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摘要：目的： 探讨2012-2014年我院革兰阴性杆菌的耐药情况。方法：选取我院2012年1月-2014年12月我院各科室痰液、血液、尿液、粪便、脓性分泌液等体液标本分离到的革兰阴性菌进行耐药分析。结果：2012年～2014年共分离革兰阴性菌1998株，分离的前2位致病菌为：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌。大肠埃希菌的药物敏感试验中敏感率前3位药物分别为：阿米卡星、美罗培南、庆大霉素，耐药率前3位分别为：头孢呋辛、氨苄西林/舒巴坦、氯霉素。铜绿假单胞菌的药物敏感试验中敏感率前3位药物分别为：莫西沙星、庆大霉素、左氧氟沙星，耐药率前3位分别为：头孢呋辛、氨苄西林/舒巴坦、氯霉素。结论：本次研究认为目前我院革兰阴性杆菌耐药情况严重，尤其是对β-内酰胺类、氟喹诺酮类等主要抗菌药物，严重威胁到患者生命，因此需要临床医生及时依照药敏试验，联合规范使用抗生素治疗感染性疾病。
关键词：非发酵菌 ；革兰阴性杆菌 ；耐药 ；
细菌耐药性监测对掌握细菌的耐药动向，指导临床合理用药有积极的指导意义。目前细菌耐药中心采用平皿二倍稀释法测定致病菌的MIC值，并按NCCLS标准，计算细菌耐药率、中介率与敏感率。为了更好的监测我院近几年细菌的耐药和敏感现状，我们本次拟收集我院2012-2014年革兰阴性杆菌的药敏试验结果，为我院临床医生临床合理用药提供指导。
1 材料与方法
1.1 细菌来源 选取我院2012年1月-2014年12月我院各科室病人痰液、血液、尿液、粪便、脓性分泌液等体液标本分离的革兰阴性菌标本，进行分析。
1.2.方法 （1）培养基：按NCCLS2001，除中国蓝为国内产品外，全部培养剂采用英国Oxoid公司产品。（2）鉴定方法：采用VITEK系统鉴定方法对革兰阴性菌进行鉴定。（3）API鉴定系统：均为Mio Merieux公司产品。（4）药敏试验：采用纸片法或微量稀释法。（5）抗菌药物：阿米卡星、氯霉素、莫西沙星、庆大霉素、美罗培南、左氧氟沙星、米诺环素、头孢哌酮、哌拉西林、复方新诺明、头孢他啶、阿莫西林/克拉维酸、头孢吡肟、氨苄西林/舒巴坦、头孢呋辛。
1.3 数据录入 将数据录入EXECEL表格内，由专人负责数据核对后，对有疑问数据进行复核，然后录入 SPSS 18.0 分析软件。
1.2.4
2 结果
2.1 2012年～2014年革兰阴性杆菌数量以及主要菌种 2012年～2014年共分离革兰阴性菌1998株，前2位主要分离致病菌为：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌。见表1。
表1 2012年～2014年革兰阴性杆菌细菌比例
2.2 2012～2014年365株大肠埃希菌药敏试验结果分析 大肠埃希菌的药物敏感试验中敏感率前3位药物分别为：阿米卡星、美罗培南、庆大霉素，耐药率前3位分别为：头孢呋辛、氨苄西林/舒巴坦、氯霉素，见表3.
表3 2012～2014年365株大肠埃希菌药敏试验结果分析
2.3 2012～2014年307株铜绿假单胞菌对药敏试验结果分析 铜绿假单胞菌的药物敏感试验中敏感率前3位药物分别为：莫西沙星、庆大霉素、左氧氟沙星，耐药率前3位分别为：头孢呋辛、氨苄西林/舒巴坦、氯霉素，见表4.
表4 2012～2014年307株铜绿假单胞菌对药敏试验结果分析
3讨论
关于细菌的药敏试验常用的有纸片扩散法、肉汤微量稀释法和微量稀释法[1]。我们研究采用国内外广泛使用并实践价值高的纸片扩散法或微量稀释法[2]。虽然工作量大，但实验重复性好。
目前，国内各大医院的革兰阴性杆菌耐药趋势呈每年增多。我们本次研究发现以临床分离率前2位的分别为大肠埃希菌、铜绿假单胞菌，药敏试验中我们发现对主要抗菌药物如阿米卡星、莫西沙星、美罗培南、左氧氟沙星、头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮、哌拉西林等耐药率非常高，与国外研究一致[3]。从药敏结果看，大肠埃希菌、铜绿假单胞菌对碳青霉烯类、β-内酰胺酶、或复方酶抑制剂、大环内酯类、第3代或第4代头孢菌素或氨基糖苷类均显示耐药性有逐步提高趋势。在亚洲地区，有一项多中心、跨地域的研究指出大肠埃希菌与铜绿假单胞菌在多数国家和地区呈现出多耐药特性。还有研究指出大肠埃希菌或铜绿假单胞菌不仅呈现多耐药，泛耐药，甚至全耐药菌不断出现，一旦感染后死亡率极高，且病人的平均住院时间长于普通细菌感染[4]。大肠埃希菌或铜绿假单胞菌耐药机制包括生物被膜的形成及调控，主动外排泵系统，增加外膜通透性，产生A类β-内酰胺酶（ESBLs）、B类金属酶（MBLs）、 C类β-内酰胺酶（AmpC酶）、D类β-内酰胺酶（OXA型酶），氨基糖苷类修饰酶， 整合子及DNA错配修复系统， DNA拓扑异构酶及DNA回旋酶突变等[5]。
综上所述，本次研究认为目前我院革兰阴性杆菌耐药情况严重，尤其是对β-内酰胺类、氟喹诺酮类等主要抗菌药物，严重威胁到患者生命，因此需要临床医生及时依照药敏试验，联合规范使用抗生素治疗感染性疾病。
参考文献：
[1]李家泰，Weinsten AJ，杨敏，等.中国细菌耐药监测研究[J].中华医学杂志，2011，81：8-16.
[2]李耘，王进.中国医院和社区获得性感染革兰阳性球菌耐药性监测研究[J].中华医学杂志，2014，83：365-374.
[3]朱元珏，胡文芝.舒普深与泰能临床疗效观察[J].中华内科杂志，2014，35：819-823.
[4] 李家泰，杨敏.中国细菌耐药监测研究[J].中华医学杂志，2014，81：8-16.
[5] Rhomberg PR. Antimicrobial spectrum of activity for meropenem and nine broad spectrum antimicrobials[J]. Diagn Microbiol ， 2014，47：365-372.
关键词：非发酵菌 ；革兰阴性杆菌 ；耐药 ；
细菌耐药性监测对掌握细菌的耐药动向，指导临床合理用药有积极的指导意义。目前细菌耐药中心采用平皿二倍稀释法测定致病菌的MIC值，并按NCCLS标准，计算细菌耐药率、中介率与敏感率。为了更好的监测我院近几年细菌的耐药和敏感现状，我们本次拟收集我院2012-2014年革兰阴性杆菌的药敏试验结果，为我院临床医生临床合理用药提供指导。
1 材料与方法
1.1 细菌来源 选取我院2012年1月-2014年12月我院各科室病人痰液、血液、尿液、粪便、脓性分泌液等体液标本分离的革兰阴性菌标本，进行分析。
1.2.方法 （1）培养基：按NCCLS2001，除中国蓝为国内产品外，全部培养剂采用英国Oxoid公司产品。（2）鉴定方法：采用VITEK系统鉴定方法对革兰阴性菌进行鉴定。（3）API鉴定系统：均为Mio Merieux公司产品。（4）药敏试验：采用纸片法或微量稀释法。（5）抗菌药物：阿米卡星、氯霉素、莫西沙星、庆大霉素、美罗培南、左氧氟沙星、米诺环素、头孢哌酮、哌拉西林、复方新诺明、头孢他啶、阿莫西林/克拉维酸、头孢吡肟、氨苄西林/舒巴坦、头孢呋辛。
1.3 数据录入 将数据录入EXECEL表格内，由专人负责数据核对后，对有疑问数据进行复核，然后录入 SPSS 18.0 分析软件。
1.2.4
2 结果
2.1 2012年～2014年革兰阴性杆菌数量以及主要菌种 2012年～2014年共分离革兰阴性菌1998株，前2位主要分离致病菌为：大肠埃希菌、铜绿假单胞菌。见表1。
表1 2012年～2014年革兰阴性杆菌细菌比例
2.2 2012～2014年365株大肠埃希菌药敏试验结果分析 大肠埃希菌的药物敏感试验中敏感率前3位药物分别为：阿米卡星、美罗培南、庆大霉素，耐药率前3位分别为：头孢呋辛、氨苄西林/舒巴坦、氯霉素，见表3.
表3 2012～2014年365株大肠埃希菌药敏试验结果分析
2.3 2012～2014年307株铜绿假单胞菌对药敏试验结果分析 铜绿假单胞菌的药物敏感试验中敏感率前3位药物分别为：莫西沙星、庆大霉素、左氧氟沙星，耐药率前3位分别为：头孢呋辛、氨苄西林/舒巴坦、氯霉素，见表4.
表4 2012～2014年307株铜绿假单胞菌对药敏试验结果分析
3讨论
关于细菌的药敏试验常用的有纸片扩散法、肉汤微量稀释法和微量稀释法[1]。我们研究采用国内外广泛使用并实践价值高的纸片扩散法或微量稀释法[2]。虽然工作量大，但实验重复性好。
目前，国内各大医院的革兰阴性杆菌耐药趋势呈每年增多。我们本次研究发现以临床分离率前2位的分别为大肠埃希菌、铜绿假单胞菌，药敏试验中我们发现对主要抗菌药物如阿米卡星、莫西沙星、美罗培南、左氧氟沙星、头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮、哌拉西林等耐药率非常高，与国外研究一致[3]。从药敏结果看，大肠埃希菌、铜绿假单胞菌对碳青霉烯类、β-内酰胺酶、或复方酶抑制剂、大环内酯类、第3代或第4代头孢菌素或氨基糖苷类均显示耐药性有逐步提高趋势。在亚洲地区，有一项多中心、跨地域的研究指出大肠埃希菌与铜绿假单胞菌在多数国家和地区呈现出多耐药特性。还有研究指出大肠埃希菌或铜绿假单胞菌不仅呈现多耐药，泛耐药，甚至全耐药菌不断出现，一旦感染后死亡率极高，且病人的平均住院时间长于普通细菌感染[4]。大肠埃希菌或铜绿假单胞菌耐药机制包括生物被膜的形成及调控，主动外排泵系统，增加外膜通透性，产生A类β-内酰胺酶（ESBLs）、B类金属酶（MBLs）、 C类β-内酰胺酶（AmpC酶）、D类β-内酰胺酶（OXA型酶），氨基糖苷类修饰酶， 整合子及DNA错配修复系统， DNA拓扑异构酶及DNA回旋酶突变等[5]。
综上所述，本次研究认为目前我院革兰阴性杆菌耐药情况严重，尤其是对β-内酰胺类、氟喹诺酮类等主要抗菌药物，严重威胁到患者生命，因此需要临床医生及时依照药敏试验，联合规范使用抗生素治疗感染性疾病。
参考文献：
[1]李家泰，Weinsten AJ，杨敏，等.中国细菌耐药监测研究[J].中华医学杂志，2011，81：8-16.
[2]李耘，王进.中国医院和社区获得性感染革兰阳性球菌耐药性监测研究[J].中华医学杂志，2014，83：365-374.
[3]朱元珏，胡文芝.舒普深与泰能临床疗效观察[J].中华内科杂志，2014，35：819-823.
[4] 李家泰，杨敏.中国细菌耐药监测研究[J].中华医学杂志，2014，81：8-16.
[5] Rhomberg PR. Antimicrobial spectrum of activity for meropenem and nine broad spectrum antimicrobials[J]. Diagn Microbiol ， 2014，47：365-372.