目的构建一种易于研究乳腺癌循环肿瘤细胞(CTCs)过表达绿色荧光蛋白GFP的4T1细胞株。方法通过慢病毒感染,使小鼠三阴性恶性乳腺癌4T1细胞稳定过表达GFP,构建4T1细胞株(4T1-G);将该细胞接种于BALB/c小鼠乳腺脂肪垫内,制作小鼠4T1-G乳腺癌原位移植荷瘤模型,应用免疫磁珠分选结合GFP荧光方法检测动物模型外周血中的循环4T1-G细胞。结果经慢病毒感染过表达GFP的4T1-G细胞其迁移与侵袭能力及上皮间质转化(EMT)表型标志物的表达与亲本4T1细胞无显著性差异。4T1-G细胞接种BALB/c小鼠后,在接种部位观察到肿瘤生长,通过免疫磁珠分选结合GFP荧光成功分选小鼠乳腺癌模型外周血中的循环4T1-G细胞。结论 4T1-G乳腺癌GFP稳定表达细胞株不仅其荧光特性易于CTCs的确认,而且保持亲本细胞的EMT表型和侵袭特性,因此,4T1-G乳腺癌GFP稳定表达细胞株的构建为开展CTCs及肿瘤转移的整体动物研究提供一个良好的模型。