【摘 要】
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目的 采用噬菌体表面呈现和重组抗体技术构建人噬菌体抗体基因库,筛选获得人源抗呼吸道合胞病毒(RSV)Fab段基因并在原核细胞中表达.为研制安全、有效的预防和治疗RSV感染的制
【机 构】
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北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
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目的 采用噬菌体表面呈现和重组抗体技术构建人噬菌体抗体基因库,筛选获得人源抗呼吸道合胞病毒(RSV)Fab段基因并在原核细胞中表达.为研制安全、有效的预防和治疗RSV感染的制剂奠定基础.方法 从RSV感染患儿恢复期外周血淋巴细胞中提取细胞总RNA,用一组人IgG Fab特异性引物,通过RT-PCR扩增得到一组轻链(κ和λ)和重链Fab段基因,并将此轻链和重链基因片段克隆于pComb3噬菌体载体,电转化XL1-Blu菌构建成抗RSV噬菌体抗体基因库.用纯化病毒颗粒作抗原对此抗体库进行了富集筛选,得到了特异性针对RSV的人源单克隆抗体Fab段基因,并在大肠杆菌中获得有效表达.用ELJSA方法检测了此Fab抗体的抗原特异性,并对阳性克隆进行了基因序列分析.结果 所构建的抗体库库容为108,从此抗体库中筛选得到的阳性克隆所表达的Fab抗体能与RSV纯化抗原特异性结合,保留了对RSV的抗原特异性.核苷酸序列分析证实,所获得的阳性克隆基因为人源IgG基因.结论 本实验获得了特异性抗RSV Fab抗体基因并在大肠杆菌中获得表达,表达产物能与RSV抗原特异性结合.
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