【摘 要】
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目的探讨沉默脯氨酸羟化酶2（PHD2）在人肾小管上皮细胞（HK-2）低氧损伤中对自噬的调控作用及相关机制。方法采用氯化钴（200 μmol/L）建立体外HK-2细胞的化学低氧模型，观察低氧培养后的不同时间点（0、6、12、24、36、48 h）电镜下的细胞超微结构改变，Alamar Blue法测定细胞存活率并评估细胞凋亡和自噬水平。同时转染HIF-1 siRNA、PHD2 siRNA，探讨PHD2
【机 构】
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目的探讨沉默脯氨酸羟化酶2（PHD2）在人肾小管上皮细胞（HK-2）低氧损伤中对自噬的调控作用及相关机制。
方法采用氯化钴（200 μmol/L）建立体外HK-2细胞的化学低氧模型，观察低氧培养后的不同时间点（0、6、12、24、36、48 h）电镜下的细胞超微结构改变，Alamar Blue法测定细胞存活率并评估细胞凋亡和自噬水平。同时转染HIF-1 siRNA、PHD2 siRNA，探讨PHD2在低氧情况下对自噬的调控机制。
结果PHD2在常氧下也有表达，随着低氧刺激的持续其蛋白水平逐渐上调，24 h时出现明显变化（P<0.01），48 h表达最为显著（P<0.01）。PHD2 siRNA转染后HK-2细胞在低氧培养24 h时HIF-1的蛋白表达显著升高（P<0.01），HIF-2α表达无明显改变。与阴性对照siRNA组相比，PHD2 siRNA转染组Bcl-xl蛋白水平上调（P<0.01），Bax及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下调（均P<0.01），同时细胞活力上升[（37.04±3.25%比（28.32±2.41）%，P<0.01]。氯化钴处理前加入3-甲基腺嘌呤（3-MA，5 mmol/L）后，HK-2细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值变化以及细胞活力与PHD2 siRNA转染结果相似，同时电镜下显示自噬体较单纯低氧组减少，细胞的超微结构也相对完整。同时沉默PHD2和HIF-1α则消除了由单独沉默PHD2带来的保护作用。
结论沉默PHD2可能通过稳定HK-2细胞的HIF-1α活性、上调Bcl-xl蛋白水平，从而抑制细胞凋亡和自噬并减轻化学低氧诱导的细胞损伤。
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