【摘 要】
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目的探讨结肠癌细胞株RKO中Annexin A5对ERK1/2 MAPK-Bax凋亡通路的影响。方法慢病毒转染人结肠癌RKO细胞后进行稳定细胞株筛选;用流式凋亡和Hoechst 33258实验探究Annexin A
【机 构】
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广西医科大学,广西医科大学第一附属医院结直肠肛门外科,
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目的探讨结肠癌细胞株RKO中Annexin A5对ERK1/2 MAPK-Bax凋亡通路的影响。方法慢病毒转染人结肠癌RKO细胞后进行稳定细胞株筛选;用流式凋亡和Hoechst 33258实验探究Annexin A5沉默前后的细胞株凋亡情况;采用RT-PCR法及蛋白质印迹法验证Annexin A5沉默前后ERK1/2、Bax和Bcl-2的mRNA与蛋白表达量的变化。结果实验组相对于空白对照组Annexin A5的mRNA相对表达量从1.010±0.017下降到0.056±0.005,下降了(95.34±1.54)%,F=2 320.600,P<0.000 1。Annexin A5沉默前后的细胞凋亡率分别为(24.87±6.18)%和(10.7±2.66)%,沉默后凋亡率较之前明显下降,t=3.57,P=0.023。Annexin A5沉默后Bax的mRNA相对表达量从1.000±0.000下降到0.732±0.034,下降了(26.79±3.41)%,F=9.884,P<0.05;但蛋白相对表达量无明显变化,P=0.945;Bcl-2mRNA相对表达量从1.000±0.000上升到1.592±0.085,上升了(59.17±8.49)%,F=84.026,P<0.001;蛋白相对表达量从0.671±0.018上升到1.580±0.019上升了(135.78±8.89)%,F=2 195.872,P<0.000 1。磷酸化后的ERK1/2蛋白相对表达量从0.917±0.062上升到1.041±0.045,上升了(13.75±5.88)%,F=6.948,P<0.05。结论Annexin A5本身可能影响或参与了肿瘤细胞的凋亡过程,ERK1/2 MAPK凋亡通路可能是其影响或参与机制之一。
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