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目的
研究临床依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)相关蛋白的氨基酸及其编码基因序列.
方法以罗氏绝对浓度法药敏实验鉴定临床依R菌株(49株)、耐R菌株(54株)和R敏感菌株(30株),用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)法对不同临床菌株及H37Rv标准株共计134株菌株的菌体蛋白质图谱进行比较分析,通过Q-TOF2型毛细管液相色谱-电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱仪(LC-ESI-MS-MS) 对其差异表达蛋白的氨基酸序列进行鉴定,并用对其蛋白的编码基因进行DNA序列分析.
结果不同菌株的SDS-PAGE菌体蛋白图谱基本相似.49株依R菌有41株(84%)在含R管中的菌体蛋白图谱有一条相同的高表达蛋白带(相对于标准物分子质量43 000的下端),约占总菌体蛋白的30%～50%,H37Rv标准株、28株R敏感菌(28/30)及44株耐R菌(44/54)的含R管和对照管的蛋白图谱相似,且无相应的高表达现象;该高表达蛋白经氨基酸序列鉴定为结核分枝杆菌H37Rv假设蛋白Rv0341,相对分子质量为43 894,等电点(PI)5.25,得分183.不同菌株的Rv0341编码基因1 440 bp扩增片段,经DNA测序分析均未发现突变.
结论利福平对 Rv0341在依R菌中的表达有上调作用,Rv0341与依R菌相关,可视为依R菌的相关蛋白或标志物;Rv0341与依R菌的毒力及细胞壁的合成是否相关有进一步的研究价值.